[发明专利]半乳糖诊断/测定试剂盒及半乳糖浓度测定方法无效
申请号: | 200710023385.3 | 申请日: | 2007-06-13 |
公开(公告)号: | CN101324581A | 公开(公告)日: | 2008-12-17 |
发明(设计)人: | 王尔中 | 申请(专利权)人: | 苏州艾杰生物科技有限公司 |
主分类号: | G01N33/66 | 分类号: | G01N33/66;G01N21/31;C12Q1/26;C12Q1/00 |
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地址: | 215021江苏省苏州市工*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 半乳糖 诊断 测定 试剂盒 浓度 方法 | ||
技术领域
本发明涉及一种半乳糖诊断/测定试剂盒,同时本发明还涉及测定半乳糖浓度的方法,属于医学/食品检验测定技术领域。
背景技术
牛奶在营养界素有“液体黄金”的美称,我国早在1992年由七部位联合提出:“一杯牛奶强壮一个民族”的口号。奶类除不含纤维素外,几乎含有人体所需要的各种营养素。牛奶中的乳糖进入人体后,经小肠乳糖酶作用分解成葡萄糖和半乳糖。半乳糖是婴儿大脑发育的必需物质,与婴儿大脑的迅速成长有密切关系。
牛奶虽好但并不是所有的人都能享受,有些人由于乳糖酶的缺乏,人体不能很好的消化吸收牛奶中的营养素,还会造成钙、磷、钾、铁等元素的吸收障碍,影响婴幼儿的体格和智力发育,在老年人中,乳糖酶缺乏是造成骨质疏松的重要原因。中国成年人饮用牛乳后乳糖吸收不良的发病率高达86.7%,不耐受指数为0.9。
为了避免不适当饮奶对健康造成的损害,因此最好在饮奶前检查自己是否耐受乳糖,在饮用牛奶后,测试尿液中半乳糖的浓度,这是目前国外最常用的一种方法,更为简便、经济、可靠。
发明内容
本发明要解决的技术问题是:提出一种利用酶比色法(EnzymaticColorimetric Method)及酶联法(Couple Reaction)技术,计量通过酶联反应生成吲嗒胺色原(Indamine dye)或醌亚胺色原(Quioneimine dye)所导致在400-700nm波长处吸光度的上升,得以测定半乳糖浓度的方法,同时,本发明还将给出用以实现该方法的半乳糖诊断/测定试剂盒,采用该试剂不仅可以在可见光分析仪或半、全自动生化分析仪上进行半乳糖浓度测定,而且测定速度快、灵敏度大、准确度高,因而可以得到切实的推广应用。
本发明半乳糖浓度测定方法原理如下:
半乳糖+氧半乳糖氧化酶半乳糖hexodialdose+过氧化氢
过氧化氢+还原型色原体组合过氧化物酶吲嗒胺色原或
醌亚胺色原+水
这个方法应用半乳糖氧化酶(galactose oxidase;EC 1.1.3.9)偶联过氧化物酶(peroxidase;EC 1.11.1.7)酶促反应终点/速率比色法。半乳糖氧化酶酶解半乳糖反应产生过氧化氢,再通过偶联过氧化物酶的作用,,将无色的还原型色原体组合氧化成有色的染料,从而可以通过可见光分析仪器,在400-700nm(根据还原型色原体组合的不同而定)波长处,测定染料-吲嗒胺色原(Indamine dye)或醌亚胺色原(Quioneimine dye)-含量高低的光吸收大小;通过测量400-700nm(根据还原型色原体组合的不同而定)处吸光度上升的程度/速度,得出半乳糖浓度大小测定结果。
实验表明,从测定结果的准确性和配制成本的经济性两方面综合考虑,如下成分关系的本发明半乳糖诊断/测定试剂盒较为理想:
缓冲液 100mmol/L
稳定剂 500mmol/L
过氧化物酶 30000U/L
半乳糖氧化酶 12000U/L
还原型色原体组合 0.1--20mmol/L
所述还原型色原体组合(Chromogen)可以是下列28个组合中的任何一个配对组合:
3-甲基-2-苯噻唑酮腙
石碳酸
3-甲基-2-苯噻唑酮腙
N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺
3-甲基-2-苯噻唑酮腙
N,N-双乙基-m-甲苯胺
3-甲基-2-苯噻唑酮腙
2,4-双氯石碳酸
3-甲基-2-苯噻唑酮腙
2,4,6-仨溴-3-羟基-苯磺酸
3-甲基-2-苯噻唑酮腙
3,5-双氯石碳酸磺酸
3-甲基-2-苯噻唑酮腙
3,5-双氯-2-羟基-苯磺酸
3-甲基-2-苯噻唑酮腙
N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺钠盐
3-甲基-2-苯噻唑酮腙
仨溴羥基苯甲酸
3-甲基-2-苯噻唑酮腙
双甲基苯胺
3-甲基-2-苯噻唑酮腙
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