[发明专利]糖－氢氧化铁复合物分子量及分子量分布测定方法

说明书

技术领域

本发明属于分子量测量领域，涉及糖-氢氧化铁复合物分子量及分子量分布测定方法，具体地说是以蔗糖铁(蔗糖-氢氧化铁复合物)为代表的糖-氢氧化铁复合物的分子量及其分布的测定方法。

背景技术

糖-氢氧化铁复合物是目前广泛应用的抗缺铁性贫血的补铁剂，特别是应用于肾脏疾病血液透析所导致的缺铁性贫血。该类复合物的分子量及分子量分布是评价其质量的重要指标之一，研究发现糖-氢氧化铁复合物分子量及分子量分布与药物的药理作用、临床疗效和铁的生物利用率存在着密切的关系，因此准确测定糖-氢氧化铁复合物的分子量和分子量分布对于控制和提高产品质量有着十分重要的意义。

糖-氢氧化铁复合物的结构核心是多核氢氧化铁(III)，核心的表面被大量非共价结合的糖分子所占据，从而形成平均分子量从几千到几百万道尔顿(da)的大分子复合物。如上所述：蔗糖铁的分子量及分子量分布范围是评价该产品质量的重要指标，准确测定糖-氢氧化铁复合物的分子量和分子量分布对于控制和提高产品质量有着十分重要的作用。而传统的测定大分子多糖分子量的方法多采用高效凝胶过滤色谱法，这是一种测定分子量及分布的相对方法，测量的准确性往往依赖于对分子量标准品的选取。若所选用的标准物质与被测物质的化学结构有较大差异，就会导致测试结果与被测物的实际分子量有较大的差异。

目前，一般采用的多糖分子量标准品多为线性分子结构，如葡聚糖、聚麦芽三糖和右旋糖苷等。而糖-氢氧化铁复合物却有特殊的结构，它是糖通过其活泼羟基取代多核氢氧化铁胶体母核表面的水分子与之结合所形成的同心球结构。由蔗糖铁原子力显微镜图(见图1)可见蔗糖铁分子为球状分子且表面面不光滑，其表面凸出结构是蔗糖络合形成的，据此推断蔗糖铁分子为蔗糖分子通过络合并包被三价铁母核形成的同心球状结构。这与多糖的线性结构有很大的不同，如果直接使用一般的多糖分子量标准品测定糖-氢氧化铁复合物的分子量及分布显然会带来很大的误差，不利于该类产品的质量控制。鉴于此，为了更准确、更方便的测定这类复合物的分子量，在使用一般多糖分子量标准品绘制分子量标准曲线时，须采用适当的方法对分子量标准曲线进行校正。而另一个方面，选取合适的糖．氢氧化铁复合物标准品绘制分子量标准曲线，也同样可以达到准确测定的目的，还可以避免繁琐的普适校正工作。

发明内容

本发明的目的是建立一种普适校正法测定糖-氢氧化铁复合物分子量及其分布的高效凝胶过滤色谱法方法。

本发明的另一个目的是建立一种无需校正的测定糖-氢氧化铁复合物分子量及其分布的高效凝胶过滤色谱法方法。

本发明的普适校正法的原理为Mark-Houwink经验公式【η＝KM^α]。公式中η为特性粘数，M为分子量，K、α为系数，普适校正法标准曲线的方程式推导如下：

标准物1：

以lg[η]M-V₀订定相对标准曲线，得一次方程为：V₀=a-blgM₁(式1)

标准物2：

由式K1M11+α1=K2M21+α2]]>得