[发明专利]一种重组戊型肝炎病毒蛋白、其制备方法及用途

说明书

一、技术领域

本发明属于分子生物学及医学领域，特别涉及一种重组戊型肝炎病毒蛋白、其制备方法及用途。

二、背景技术

现有技术：戊型肝炎病毒(hepatitis E virus，HEV)是引起东南亚、中亚以及非洲等地急性传染性肝炎的主要病原体。HEV主要经过粪-口途径传播，通常是饮用受污染的水源引起，HEV引起的戊肝流行方式主要有暴发流行和散发两种。HEV的感染可以累及不同年龄的患者，但感染多见于成年人。一般来说，戊肝和甲肝的临床症状相似，目前的研究认为，在一些发展中国家HEV的感染率已经超过甲肝的感染率，而且病情也更为严重，研究显示在各类肝炎中，戊肝的病死率最高，尤其是在孕妇患者中，死亡率甚至超过20％。

作为发展中国家，我国HEV的感染情况同样值得重视。1986～1988年我国新疆南部地区曾发生HEV水型流行，共计发病119280例，死亡707例，是迄今为止世界上最大的一次戊肝流行。有学者对我国17个城市2548例急性散发型病毒性肝炎的血清学调查研究发现，戊肝占3.4～26.3％，平均为9.7％。而我们近来对全国10个省市及华东部分地区大规模人群的的调查研究发现，HEV IgG抗体的阳性率分别约为18％和17％。此外，卫生部的统计报告也表明，我国HEV的流行方式主要呈散发和小规模暴发两种形式，每年均有十数起小规模HEV的暴发流行，而且发病人数呈逐年上升趋势。其中2004年我国戊肝的发病人数几乎为2003年的两倍。由于目前尚缺乏特异性的治疗方法，因此控制HEV的传播和流行的手段主要是通过研制特异性的戊肝疫苗加以预防。

由于HEV缺乏有效的细胞培养系统，无法制备减毒疫苗或灭活疫苗，国内外研究多集中于基因工程重组戊肝疫苗的研制，因此采用合适的表达系统表达含有HEV中和抗原表位的重组HEV蛋白，对于研制有效的戊肝疫苗极为重要。尽管目前已有学者采用真核和原核表达系统成功制备了一些重组HEV蛋白，但是，由于采用真核表达系统费时费力费钱，采用原核表达系统时产物均以包涵体形式存在，需要经历变性和复性的过程，容易影响重组蛋白的天然构象，并造成产量的降低。因此，众多学者一直致力于采用原核表达系统表达天然可溶的重组HEV蛋白。然而，迄今为止仍无成功研制的报道。

三、发明内容

本发明针对上述技术问题，提供一种方便易行、低成本并具有良好的抗原性和免疫原性的重组戊型肝炎病毒蛋白、其制备方法及用途。

本发明的技术解决方案为：提供一种分离的重组戊型肝炎病毒多肽，它选自下组：a.具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽；b.将SEQ ID NO：2氨基酸序列经过一个或数个氨基酸残基的缺失、插入或取代形成的，且具有能够诱导高滴度的、特异性的HEV中和抗体产生的由a衍生的多肽。提供一种多肽，该多肽是具有具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。提供一种分离的多核苷酸，选自下组：a.编码上述氨基酸序列多肽的多核苷酸；b.与多核苷酸a完全互补的多核苷酸。提供一种多核苷酸，该多核苷酸编码具有SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的多肽。提供上述多核苷酸的载体。一种遗传工程化的宿主细胞，其含有上述载体。一种重组戊型肝炎病毒多肽的制备方法，该方法包括：a.在适合表达重组戊型肝炎病毒多肽的条件下，培养所述的宿主细胞；b.从培养物中分离出重组戊型肝炎病毒多肽。一种诊断试剂或疫苗，它含有安全有效剂量的所述的多肽或所述的多核苷酸或所述的载体，以及药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体。

本发明所述的一种新型重组HEV蛋白，含有179个氨基酸(HEVp179)。其氨基末端位于开放阅读框架2编码衣壳蛋白的380位至480位氨基酸之间，羧基末端位于580位至650位氨基酸之间或由此蛋白片段产生的衍生物，优选片段是戊型肝炎病毒第4基因型毒株开放读码框架2中编码中和抗原表位的位于第453位至631位氨基酸序列的基因片段。该重组HEV蛋白的特征在于含有戊型肝炎病毒的中和抗原表位，其编码的基因片段能够在原核表达系统中高效、可溶性表达，经过纯化后可以形成戊型肝炎病毒样颗粒(Hepatitis E viruslike paticles，HEV p179-VLPs)。

本发明所述重组HEV蛋白的制备方法方法：将编码HEV中和抗原表位的优选基因片段与质粒pET-28a(+)或经改造的质粒pET-28a(+)进行重组，再将该重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)，在IPTG的诱导下进行表达。上述优选基因片段的核苷酸序列为：