[发明专利]防治温室蔬菜根结线虫病的生防菌株

说明书

一、技术领域

本发明涉及一种防治温室蔬菜根结线虫病生防菌株AR156，属于农作物防病治病技术领域，专用于蔬菜根结线虫病的无公害防治。

二、技术背景

根结线虫(Meloidogyne spp.)属植物根系专性内寄生物，是世界性分布的威胁农业生产的主要病原物，也是世界各国的对外检疫对象。它不仅使作物产量减少，品质降低，而且可与其他病原物一起造成复合侵染。迄今已记载的根结线虫有约70种，其中南方根结线虫(M.incognita)、爪哇根结线虫(M.javanicica)和花生根结线虫(M arenaria)因其广分布性和多寄主性，是最重要的植物寄生线虫种类。在中国，这三种根结线虫在大多数省(区)均有发生，侵染农作物达百种以上，大田作物、蔬菜、果树、花卉、药用植物等几乎每种作物均可受到侵染。蔬菜根结线虫病(为害对象：黄瓜、冬瓜、西瓜、丝瓜、番茄、辣椒、茄子、马铃薯、莴苣、菠菜、胡萝卜、白菜、豆科蔬菜等几乎所有蔬菜)是国内外最为严重的植物病害之一。由植物寄生线虫侵袭寄生引起的植物病害，受害植物可因侵入线虫吸收体内营养而影响正常的生长发育；线虫代谢过程中的分泌物还会刺激寄主植物的细胞和组织，导致植株畸形，使农产品减产和质量下降；此外，还可以通过线虫危害，加剧其它病害的发生，尤其是保护地蔬菜，致使寄主常年减产15-25％，有时达70％以上，严重地制约了大棚蔬菜、果树、花卉等作物的生产和出口创汇，有的甚至到了无法种植的地步。据估计，我国农作物的生产每年因根结线虫的为害而遭受的经济损失达数亿元以上。

由于根结线虫病害属于土传病害，所以防治较为困难。目前，人们主要采取有机磷类化学杀线虫剂、选种抗病作物品种、实施轮作、建立无病种苗基地和对进出口农作物进行严格的检疫来控制根结线虫病害的发生。化学杀线虫剂虽防效显著，但其选择性差，破坏农作物的生态环境；不易降解，高残留，对人畜极不安全；破坏土壤结构，造成土壤沙化；抗药性问题日益突出。这些因素使得化学杀虫剂的使用范围已受到严格的限制。因此，非化学性防治措施目前已成为农作物根结线虫病治理的核心，而生物防治则为其中最有前途的方法。现有技术中按照本实验室的菌体保藏液专利(公开专利号CN1358838，公开日：2002年7月17日)方法，菌体可室温保存2～3年。

三、发明内容

技术问题：本发明的目的是针对现有技术中的对根结线虫病害有较高防效的生防制剂主要集中在一些真菌制剂、使用成本过高的缺陷，提供开发一种防治蔬菜根结线虫病害的单一生防菌菌株及其菌剂，该菌剂的防效可达50％以上，并且有增产功能。

技术方案

一种防治温室蔬菜根结线虫病的生防菌株AR156，为芽孢杆菌属(Bacillus sp.)，2007年1月26日寄存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC NO.1929。

生防菌株AR156用于制备生防菌剂的方法为：

1)将该菌株接种到PDA培养液中分别培养37℃180rpm，16～20小时后在超净工作台中分别取样测600nm处的OD值，测定过程中以未接菌的培养液来调零；

2)当培养至OD值在0.5～0.8之间时，将种子菌液以1∶100体积比加入PDA培养液中，37℃ 180rpm振荡培养20～24小时，然后6000rpm离心10min，每1000ml培养液获得13～16g湿菌，每克湿菌含4×10¹⁰～10¹⁵个菌体，取湿菌与菌体保藏液按1g∶40ml配成菌剂，成品中活菌总浓度为1×10⁹～1×10¹²fu/ml。所用PDA培养液配制方法为：

用200克土豆削皮后切成小块放到水里煮，沸腾后至少煮20分钟以上，接着用四层医用纱布过滤，滤液加20克普通蔗糖，定容至1000毫升，pH值调至7.2～7.4，然后121℃灭菌20分钟。

有益效果

本发明的优点和积极效果表现在：本发明是专门针对蔬菜根结线虫病开发的生防制剂。由于是生物制剂，完全没有因化学农药的使用所带来的一系列问题，因而有利于蔬菜的无公害生产，农民可以不用或减少其他防治蔬菜根结线虫病化学农药的用量，这不仅可为农民节省开支，而且有利于蔬菜的出口。同时，该菌剂还有增产功能，可为农民增加收入。