[发明专利]磺胺类药物直接竞争酶联免疫检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种磺胺类药物直接竞争酶联免疫检测试剂盒，具体地说是用于食品和饲料中磺胺类药物残留量的检测，属于酶联免疫和兽药残留检测技术领域。

背景技术

因磺胺类药物具有抗菌谱广，能抑制大多数革兰氏阳性菌和阴性菌，性质稳定便于长期保存，价格比较便宜，又有长效、中效、短效等各种制剂的优点，不仅广泛用于人类，还广泛用于兽医临床，在动物的防病、治病方面具有显著的疗效。它们的用药方式可以是加药饲料、水剂、丸剂或针剂。通常将磺胺类药物用于家禽以预防球虫病、霍乱和感染性鼻炎；在水产品养殖过程中用于控制疔疮和肠败血症等；同时还以亚临床治疗剂量，作为饲料添加剂，用于防病和促进动物生长，以提高奶牛、生猪的抗病能力和增进其食欲，提高产奶量和产肉量。

由于此类药物在体内作用和代谢时间较长，若不按规定要求合理地使用与停药，易引起在动物体内残留，并通过奶、肉、蛋借食物链以低剂量传递，从而影响人类健康。因此，国内外对磺胺类药物等残留均有限量要求，其最大残留限量不超过100μg/kg，并且有逐步严格控制的趋势。

磺胺类药物的检测方法，有抑制微生物法、分光光度法、荧光法、薄层色谱法、气相色谱法(GC)和液相色谱法(HPLC)，以及气相色谱/质谱法(GC/MS)、液相色谱/质谱法(HPLC/MS)、免疫检测法等。气相色谱、高效液相色谱和气质联用等方法分离度好、特异性强、灵敏度高，可以同时测定多种药物。但缺点是样品的提取净化等前处理步骤繁琐，检测的成本较高，对操作人员的要求也较高，不适宜大批量样品的筛选检测，很难推广。微生物学方法缺乏灵敏度、特异性，准备工作繁琐，检测所需时间较长，在定性定量上都存在困难，不能满足测定的要求。酶联免疫法是一种快速、灵敏、特异和安全的检测小分子药物残留的检测技术，其规模化筛选特点更适用于常规化检测需要，目前，磺胺类药物残留检测试剂盒主要为接间竞争性酶联免疫检测试剂盒，与本发明直接竞争性酶联免疫检测试剂盒不同。如专利CN1262839C为接间竞争性酶联免疫检测试剂盒，是将人工抗原或二抗包被于酶标板上，检测时再加抗体，而后加酶标二抗、显色剂等。

发明内容

本发明的目的在于克服上述不足之处，从而提供一种磺胺类药物直接竞争酶联免疫检测试剂盒，其采用直接竞争酶联免疫方法定性或定量地检测食品和饲料中磺胺类药物的残留量；检测时间短、平均回收率高、批内、批间误差小，并具有简便、快速、准确的特点。

本发明的主要解决方案是这样实现的：

本发明酶联免疫检测试剂盒包括制备能产生磺胺类药物抗体的人工免疫抗原、酶标抗原、抗磺胺类药物抗体。

本发明将磺胺类药物与载体蛋白偶联制备成人工免疫抗原；用人工免疫抗原免疫动物制备抗磺胺类药物抗体；将磺胺类药物与酶偶联制备成酶标抗原。

本发明所述的酶联免疫检测试剂盒还包括标准品溶液系列试剂、酶标抗原溶液试剂、底物溶液试剂、显色剂溶液试剂、终止液试剂、酶标抗原稀释液试剂、浓缩洗涤液试剂。

本发明所述的载体蛋白可以是牛血清白蛋白、卵血清白蛋白等。

本发明所述的抗磺胺类药物抗体为用人工免疫抗原免疫动物制备多克隆或单克隆抗体；所述的多克隆抗体或单克隆抗体可为鼠、马、羊、兔源的抗体，所述的磺胺类药物多克隆抗体优选为磺胺类药物兔多克隆抗体，所述的磺胺类药物单克隆抗体优选为磺胺类药物鼠单克隆抗体。

本发明所述的包被抗磺胺类药物抗体的多孔聚苯乙烯微量反应板在制备过程中，所用的人工免疫原是采用重氮偶合法将磺胺类药物与牛血清白蛋或卵血清白蛋白偶合得到的结合物(摩尔比1∶5～1∶20)。

本发明所述的包被缓冲溶液是pH9.6 0.05mol/L的碳酸盐缓冲液，所用的封闭液是1％～5％牛血清白蛋白或卵血清白蛋白的0.01mol/L pH7.5磷酸盐缓冲液。

本发明所述的磺胺类药物可以是磺胺二甲嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺等。所述磺胺类药物标准溶液的浓度范围为1.0μg/L～625μg/L。

本发明所述的酶标抗原中的酶为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酯酶，优选为辣根过氧化物酶，辣根过氧化物酶-磺胺类药物标记物采用二步戊二醛法制备。

本发明所述的显色剂由底物溶液和显色液组成，底物溶液为50μg/mL～200μg/mL过氧化氢或过氧化脲溶液，显色液为50μg/mL～200μg/mL邻苯二胺或四甲基联苯胺溶液。

本发明所述的终止液为1～2mol/L硫酸溶液。