[发明专利]全人源抗卵泡刺激素β单链抗体筛选方法及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及单克隆抗体技术，全人源抗体技术，尤其涉及应用噬菌体展示技术所进行的全人源抗卵泡刺激素β单链抗体筛选方法及其该抗体的用途。

背景技术

垂体促性腺激素(GTH)细胞在下丘脑GnRH刺激下，合成和释放卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)。在女性，FSH作用于卵巢的卵泡，包括促进滤泡生成、排卵前滤泡选择、通过囊膜细胞来源雄激素的芳香化作用刺激雌激素生成、颗粒细胞黄体化并诱导LH受体。在男性，垂体分泌的卵泡刺激素(FSH)和睾丸本身分泌的雄激素睾酮(T)是精子发生的激调节者。T和FSH共同作用于睾丸支持细胞(Sertoli)和管周细胞，从而启动和维持精子发生过程。FSH对精子发生的调节作用是通过Sertoli细胞介导的，Sertoli细胞是各种哺乳动物和人类睾丸中唯一具有FSH受体的体细胞，作用主要表现：①诱导动物和人精子发生的启动或始发，②引起去垂体大鼠和冬眠动物精子发生再启动，③与T一起参与维持精子发生，特别对精子发生在数量与质量完全正常所必须。理论上，抗FSH特异性抗体，消除内源性FSH的生物学作用，因此具有抗男性生育的作用；而且抗FSH特异性抗体不影响LH的作用，男子睾丸内T合成不受影响，勿需补充外源性T。其他方式的男性抗生育(除雄激素外)，如合并孕激素、GnRH类似物、GnRH抗体等，均需要补充外源性的雄激素。国外有少量应用抗FSH抗体或FSH疫苗抗生育的研究报道，目前的问题有两方面，一是抗FSH抗体对于成年男子精子发生的阻断作用不完全，以及非人源抗体应用于人类的过敏、自身免疫等；其次是人源抗体的来源极其困难。

对于真性性早熟的治疗，目前主要围绕着中枢促性腺激素释放激素(GnRH)及其受体的相关研究和治疗。阻断FSH的作用，也能达到治疗真性性早熟的目的，但还未见利用FSH-β抗体治疗男女性早熟的报道，同样是因为非人源抗体应用于人类的过敏、自身免疫等，以及人源抗体的来源极其困难。

在生殖医学、妇产科、男科、内分泌科、儿科等临床上经常需要检测血FSH水平，目前主要采用血清放射免疫方法及化学发光方法。这两种方法存在一些不足，因FSH呈脉冲式分泌，从峰谷到峰顶有20％～40％的波动，单次采血的结果往往不能反应基础或平均的水平，同一天内反复多次密集地采血又不可行。而且，正常月经周期的女性，在每个周期中血FSH是周期性波动的，在排卵期达到峰值，但仅维持1～2天，常常难以捕捉到，采用连续的每天或隔日取血的方法在临床上也不可行。九十年代后，有人采用尿液提取FSH(或LH)后在用放射免疫方法测定，可定量分析尿FSH(或LH)的排泄，间接反映循环中的激素变化。但因为尿中的FSH不稳定，容易解离为α和β亚单位，所以单纯测定尿FSH可能不能真实地反映血FSH水平。

单克隆抗体具有广泛的应用价值。单克隆抗体制备技术是将能够产生抗体的B淋巴细胞(但不能够无限分化)和能够无限分化的骨髓瘤细胞(但不能产生抗体)融合起来形成杂交瘤细胞，后者既够产生抗体又能够无限分化。但是也存在很大的局限性，特别是其鼠源性来源的背景极大地限制了单克隆抗体作为治疗制剂在人体内的应用。鼠源性抗体的自身局限性主要包括以下几点：(1)鼠源性单克隆抗体对人体有免疫原性，产生人抗鼠抗体诱发过敏反应；(2)鼠源性单克隆抗体不能有效激活人体的生物效应功能；(3)鼠源性单克隆抗体在人体内的半衰期也较短，容易被机体清除；(4)鼠源性单克隆抗体分子量较大，不易穿过细胞膜进入胞浆内；(5)鼠源性单抗制备工艺复杂，免疫动物、细胞融合难度较大，不利于大规模生产；(6)鼠源性单克隆抗体制备成本也较高。

发明内容

本发明的主要目的在于提供具有潜在医学和药学价值的全人源抗卵泡刺激素β单链抗体——抗FSH-β“A”表位的全人源单克隆抗体。

本发明的目的还在于提供一个全人源抗FSH-β单链抗体的筛选方法。

本发明的目的还在于提供全人源抗FSH-β单链抗体在男性抗生育中的用途。

本发明的目的还在于提供全人源抗FSH-β单链抗体在制备检测试剂盒中的用途。

本发明的目的还在于提供全人源抗FSH-β单链抗体在治疗性早熟疾病中的用途。

上述发明目的通过以下技术方案得以实现。