[发明专利]野生葡萄泛素结合酶基因序列

说明书

                      技术领域

本发明涉及野生葡萄泛素结合酶基因全长序列，属于生物工程领域。

                      背景技术

采用改进SDS/酚法，提取病原菌诱导的野生葡萄叶片总RNA；按照Clontech公司SMART^TMcDNA library Construction Kit方法构建文库；按照Epicentre公司Maxplax^TMPackaging Extract完成cDNA文库的包装；用Biosystems 3700 DNA analyzer进行测序，测序引物为：5’-CTCGGGAAGCGCGCCATTGTGTTGGT-3’；所获得的序列用DNASTAR软件做多序列对比，检查有无重复；利用NCBI的VecScreen(BLASTN2.2.5)程序识别并去除测序结果中的载体序列，所检索的数据库为UniVec，网址如下：htt://www.ncbi.nlm.nih.gom/vecscreen/vecscreen.html；利用NCBI的BLAST(BLASTN2.2.5)程序对去除了载体序列的测序结果作同源性分析，所检索的数据库，包括非冗余(nr)数据库(覆盖GenBank+EMBL+DDBJ+PDB)  和EST数据库  (覆盖GenBank+EMBL+DDBJ)，网址如下：htt://www.ncbi.nlm.nih.gom/BLAST/；利用简单模块构架搜索工具SMART软件对泛素结合酶基因所编码的蛋白一级序列进行功能结构域分析，网址为http://smart.embl-heidelberg.de/；利用DNASTAR软件对泛素结合酶基因所编码的蛋白质分子量和等电点进行预测。由于葡萄组织中多酚、多糖等化合物含量较高，用目前已有的RNA提取试剂盒提取的总RNA产率低、质量不高，不能用于构建cDNA文库。

                      发明内容

本发明的目的在于，提供野生葡萄泛素结合酶基因序列。本发明首次采用构建cDNA文库技术进行野生葡萄抗白粉病基因的克隆，获得了蛋白质泛素化途径关键基因-泛素结合酶基因，该基因所编码的氨基酸序列在1-30位氨基酸残基之间有HOTLOOPS结构序列，在32和174位氨基酸残基之间存在一个所有泛素结合蛋白所共有的保守催化区域UBCc结构域；该蛋白氨基酸序列全长为183个氨基酸，分子量20.8KD，等电点8.23，该基因所编码的蛋白质属于泛素结合蛋白酶E₂。cDNA片段全长核苷酸序列为：

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本发明的获取方法是：采用改进SDS/酚法所提取经病原菌诱导的野生葡萄叶片总的RNA质量和纯度高，总RNA没有降解；质量符合构建cDNA文库实验要求；采用长距离PCR方法成功构建cDNA文库；对该文库进行大量测序，获得的序列应用目前国际上通用的序列分析方法。