[发明专利]一种双色荧光定量共扩增聚合酶链反应检测试剂盒

权利要求书

1.一种双色荧光定量共扩增聚合酶链反应试剂盒，含有扩增21号染色体特异单拷贝区段DSCR和16号染色体特异单拷贝区段GAPDH体外扩增的荧光定量PCR试剂，其特征在于，首先根据21号染色体特异的DSCR区段序列和16号染色体上的GAPDH基因序列分别合成其特异引物和双色Taqman荧光探针，然后将0.1-0.5umol/L DSCR和GAPDH特异的引物、双色荧光Taqman探针加入同一个PCR扩增缓冲反应体系中，在多色实时荧光定量PCR仪上进行96℃预变性2min后，再94℃变性10sec，52-56℃复性30sec，60-70℃延伸40sec，共45个循环，并在延伸时检测荧光强度，使两对引物分别同时引导新链合成，实现两对引物的共扩增和其拷贝数的定量检测。

2.根据权利要求1所述的一种双色荧光定量共扩增聚合酶链反应试剂盒，其特征在于，所述DSCR和GAPDH特异引物和双色Taqman荧光探针的序列分别为：DSCR上游引物5’-CAG AAA TCC CAG TTC ATG TTG CT-3’；DSCR下游引物：5’-CAT TCC CGG GTG CCA TGAACA GT-3’；DSCR TaqMan探针：5’-[FAM]CAA GGC CGT GTC CCC TTG TTC[TAMRA]-3’；GAPDH上游引物：5’-ctc cct ctt tct ttg cag caa t-3’；GAPDH下游引物：5’-cag ctctea tac cat gag tcc t-3’；GAPDH TaqMan探针：5’-[HEX]ctg cac cac caa ctg ctt agc[TAMRA]-3’。

3.根据权利要求3所述的一种双色荧光定量共扩增聚合酶链反应试剂盒，其特征在于，扩增缓冲反应体系中，各个成分及其浓度含量分别如下：DSCR和6APDH特异的引物、双色荧光Taqman探针各0.1-0.5umol/L、Taq DNA聚合酶1-3U/50ul、dNTPs底物0.1-0.5mmol/L、模板DNA若干、Mg++1.5-3.5mmol/L、反应缓冲液0.5-1.5XPCR，其中1XPCR反应缓冲液包括50mmol/L KCl、10mmol/L Tris.HCl PH8.3、0.01％明胶。