[发明专利]一种与质谱在线联用的除盐膜接口及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及蛋白质样品预处理过程，具体地说是一种与质谱联用的可对蛋白质样品进行在线除盐的膜接口。

背景技术

20世纪90年代以来，伴随着蛋白质组学的提出以及电喷雾离子化(ESI)与基质辅助激光解吸解离离子化(MALDI)两种离子化方式的出现，质谱在蛋白质组学研究过程中已经成为一种必不可少的工具。但是，由于蛋白质样品非常复杂，含有很多干扰质谱分析的因素，因此对蛋白质样品进行预处理就显得非常必要。蛋白质样品预处理涉及很多内容，包括盐与变性剂等干扰因素的去除，蛋白质的预分级，低丰度蛋白质的富集与高丰度蛋白质的去除等等。其中，盐的去除一直是研究的一个热点。

低分子量的盐类会增大质谱图噪音，降低检测灵敏度，污染离子源。目前，在蛋白质样品提取过程中，广泛应用各种无机盐与有机盐。而质谱的耐盐能力有限，尤其是电喷雾离子化质谱，耐盐能力很差，因此在蛋白质鉴定之前进行除盐是必要的。

传统的除盐方法为超滤除盐。基本原理为，在离心力作用下，盐等小分子透过超滤膜，而蛋白质得以截留。此方法可以处理大量样品，但是除盐过程中蛋白质会有大量损失，耗费大量时间，而且除盐的效果并不理想。因此，发展样品损失小，耗时短，除盐效果好的除盐方法是非常必要的。

在线除盐方法的出现使得蛋白质的除盐得到快速发展。Niessen，W.M.与Abian，J.等人[文献1 Niessen，W.M.J.Chromatogr.，A 1999，856，179-197.，文献2 Abian，J.；Oosterkamp，A.J.；Gelpi，E.J.MassSpectrom.1999，34，244-254.]采用反相色谱柱除盐，将样品上样到反相色谱柱，采用低强度的洗脱条件进行洗脱，利用盐等不保留，而蛋白质保留来进行除盐。这种在线除盐的方法对高盐样品的除盐效果不好，而且对盐进行洗脱过程中，一些亲水性好的蛋白质可能会损失。Derek J.Wilson等人[文献3 Derek J.Wilson and Lars Konermann^* Anal.Chem.2005，77，6887-6894]采用一种双层流的装置来进行在线除盐，利用蛋白质分子与盐类分子的扩散系数不同来实现，但是此方法蛋白质损失较大。Qinyuan Wu等人[文献4 Qinyuan Wu，Chuanliang Liu and Richard D.Smith^*，RAPID COMMUNICATIONS IN MASS SPECTROMETRY，1996，10，835-838]采用中空纤维膜进行除盐，利用蛋白质样品与传质交换液的强制对流来实现除盐。但是，此除盐接口设计较为复杂，中空纤维膜截留分子量较大，小分子量蛋白质损失会比较大，而且中空纤维膜处死体积较大。

发明内容

本发明的目的在于提供一种与质谱在线联用的除盐接口，利用此除盐接口可以将蛋白质样品中的盐成分在线去除，而且尽量降低了蛋白质在除盐过程中的损失，从而实现了蛋白质样品的在线除盐与质谱联用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种与质谱在线联用的除盐膜接口，包括毛细管，醋酸纤维素中空纤维膜、密封容器，于密封容器相对应的两侧分别设置有样品流入口与传质交换液流出口、样品流出口与传质交换液流入口，密封容器的样品流入口和样品流出口分别穿套有毛细管，经样品流入口和样品流出口穿入密封容器内的毛细管之间套设有醋酸纤维素中空纤维膜。

密封容器的样品流入口与传质交换液流出口、样品流出口与传质交换液流入口处分别设置有聚四氟乙烯管，所述毛细管是通过样品流入口和样品流出口处聚四氟乙烯管穿套入密封容器内的；所述的聚四氟乙烯管在除盐膜接口中有两处应用。一处是用于固定毛细管，要求聚四氟乙烯管的内径要小于或者等于或者稍大于毛细管的外径；另一处是作为传质交换液的管路。

所述毛细管的内径为25μm-150μm，外径不限；如果毛细管外径小于中空纤维膜的内径，则可以直接将毛细管插入膜中，用环氧树脂胶密封连接处。如果毛细管外径大于中空纤维膜的内径，则可以将毛细管用氢氟酸刻蚀一段时间，当外径降低到小于膜内径时，再与膜连接；醋酸纤维素中空纤维膜的内径为200-400μm，截留分子量为3000-8000Da，有效长度为2cm-4cm；密封容器的容量为≥4mL。