[发明专利]牛羊无动物源冻精稀释液及牛羊冷冻精液的制作方法

说明书

技术领域：

本发明涉及生物与化学科学，特别提供了一种用无动物来源成份配制的牛羊精液稀释液以及利用此种稀释液制作牛羊冷冻精液的方法。

背景技术：

现有技术中，动物的各种精液稀释液的成份组成还没有摆脱完全离开动物来源成份的发展程度，并且精液稀释液的保存方法主要还停留在现用现配或冷冻保存的水平。在上述的这种状态下，必然存在着通过稀释液中的动物来源成份在动物与人类之间传播各种疫病的潜在风险。过于简单的单一的精液稀释液的保存方法，在很大程度上限制了动物人工授精技术的推广，增加了配制稀释液的劳动量，浪费了精液稀释液，影响了劳动生产率的提高。

因此，人们期望获得一种用无动物来源成份配制的动物(例如：牛羊)精液稀释液以及利用此种稀释液制作动物(例如：牛羊)冷冻精液的方法。

发明内容：

本发明的目的在于从非动物来源成份中筛选出有效物质配制动物的精液稀释液，杜绝传统稀释液传播疫病的潜在危险；并且改进了传统的精液稀释液的保存方法，延长了精液稀释液的保存时间，简化了精液稀释液的使用方法，填补了现有技术在此方面的空白。

本发明所述牛羊无动物源冻精稀释液，其特征在于：所述稀释液中至少包含有如下成分之一或其组合：海藻糖、丙二醇、大豆卵磷脂、可溶性大豆蛋白质、氮-三羟甲基氨基乙烷磺酸、十二酰硫酸钠。

优选方案中，在所述稀释液中还包含有如下成分之一或其组合：乳糖、果糖、乙二醇、乙二胺四乙酸、三羟甲基胺基甲烷；

进一步优选方案：在所述稀释液中还包含有如下成分之一或其组合：胆固醇、赤藓糖醇、醋铬酸、磷脂酰丝氨酸、大豆异黄酮；

在所述稀释液中还包含有用于提高解冻后的精子活力、延长精子解冻后存活时间的如下成分之一或其组合：氯前列烯醇、维生素B₁₂、咖啡因、维生素E亚硒酸钠注射液、蔗糖、磷酸盐缓冲液、氮-三羟甲基氨基乙烷磺酸(TES)、维生素B1、V_E、PG、乙二胺四乙酸(EDTA)、三羟甲基胺基甲烷(Tris)、磷酸盐缓冲液(PBS.无无犊牛血清BSA成份)、半胱氨酸、甘露醇、青霉素、链霉素。

优选方案中，所述牛羊无动物源冻精稀释液中所包含的各种成分及其含量可以为(以下所述的各种物质质量/体积为相对质量/体积比例关系)：果糖∶蔗糖∶乳糖∶海藻糖∶乙二胺四乙酸(EDTA)∶三羟甲基胺基甲烷(Tris)∶氮-三羟甲基氨基乙烷磺酸(TES)∶醋酸铬∶半胱氨酸＝(0.5g～1.4g)∶(1.5g～5g)∶(2g～5g)∶(0.3g～1g)∶(1g～2.5g)∶(1.5g～4g)∶(0.001g～0.002g)∶(0.001g～0.01g)∶(0.01g～0.2g)；

磷酸盐缓冲液(PBS.无犊牛血清BSA成份)：V_E亚硒酸钠注射溶液∶磷酸盐缓冲液∶乙二醇∶丙二醇∶赤蓟糖醇∶甘露醇∶胆固醇＝(1ml～3ml)∶(0.1ml～1ml)∶(1ml～6ml)∶(1ml～5ml)∶(1.5ml～7ml)∶(0.1ml～1.5ml)∶(0.1ml～1.5ml)∶(0.1ml～1ml)。

本发明所述牛羊无动物源冻精稀释液的配制要求具体可以是(以下所述的各种物质质量/体积为相对质量/体积比例关系)：

第一步，用电子天平称取果糖0.85g、蔗糖3.10g、乳糖3.75g、海藻糖0.58g、乙二胺四乙酸(EDTA)1.80g、三羟甲基胺基甲烷(Tris)2.45g、氮-三羟甲基氨基乙烷磺酸(TES)0.015g、醋酸铬0.003g、磷酸盐缓冲液(PBS.无无犊牛血清BSA成份)2.0ml、磷酸盐缓冲液3.0ml、半胱氨酸0.05g、乙二醇或丙二醇或二者的组合共6.0ml、赤蓟糖醇0.50ml、甘露醇0.50ml、胆固醇0.30ml；加入双蒸馏水3.0ml后将上述物质充分混合，加热煮沸后立即冷却，再加入双蒸馏水，使原有物质保持加热煮沸前的体积；

第二步，将上述物质充分混匀后，向通过上述过程获得的混合液中再加入以下物质：磷脂酰丝氨酸2.18g、可溶性大豆蛋白2.00g、大豆卵磷脂0.25g、V_B10.18g、V_B120.09g、咖啡因0.01g、氯前列烯醇0.013g、十二酰硫酸钠0.50ml、青霉素10万单位、链霉素0.1g；

第三步，将上述物质加入后充分混合，然后放入5℃～10℃的避光环境中静置20小时以上，取其上清液，弃去容器底部的不溶成份，在温度为2℃～8℃、排出空气、避光的条件下密封保存。