[发明专利]一种甘草苷的分离制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及天然药物的分离，具体地说是一种甘草苷的分离制备方法，通过工业色谱技术从传统中药甘草中分离甘草苷的制备方法。 

背景技术

甘草为豆科(Leguminosae)甘草属(Glycyrrhiza Linn.)植物乌拉尔甘草、光果甘草、胀果甘草的根及根状茎，分布遍全球各大洲，以欧亚大陆为多。我国主要分布于黄河流域以北各省区，个别种见于云南西北部。甘草根性平、味甘，具补脾、润肺、解毒、调和诸药的功能。近年通过研究发现了许多新的药理作用，甘草具有抗氧化、抗溃疡、对机体双向调节、抗病毒、抗肿瘤、以及保肝、抗心律失常等生物医学作用(HanLano T，etal..ChemPharm Bull.1988，36(6)：2090；Shibata S.Planla Med.1991，57(3)：221；马靖.癌症，2001，20(8)：806-811。)近年来国内外竞相研制、开发甘草药品和食品。 

甘草苷，英文名liquiritin，系统命名为：4′，7-二羟基双氢黄酮-4′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。文献报道甘草苷为甘草的主要成分(阎永红等.中国中药杂志，2006，31(12)：1019-1021)。甘草苷是甘草中主要活性成分，具有抗氧化、抗心律失常、抗溃疡、抗病毒、等作用，是一种很有开发前景的环境适应元药物(邢国秀等.中国中药杂志，2003，26(7)：593-597；傅乃武等.中药药理与临床，1994(5)：26-29)。文献有关甘草苷的提取分离制备的报道，基本上都是采取传统的溶剂萃取、硅胶层析等方法(朱绪民等.中草药，2003，34(3)：199-201；刘勤等.药学学报.1989，24(7)：525-531；Nakanishi T et al.Phytochemistry，1985，24(2)：339)，这些方法存在产品纯度低、重现性差、耗时长、有机残留严重、无法大规模生产等缺点。 

发明内容

本发明的目的是提供一种产品纯度高、重现性好，可以大规模生产的甘草苷分离制备方法。以满足甘草苷化合物标准品制备和大规模工业生产的需要。 

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为： 

1)提取：称取甘草原药材，加入其重量8-12倍的水煎煮提取2-3次，每次1-3小时，得到提取液，将提取液浓缩浓缩至相对密度为1.10-1.15的浸膏，得到甘草提取组分； 

2)醇沉：将浸膏中加入乙醇使乙醇体积浓度达到50-70％，0-4℃冷藏静置12-24小时，过滤，滤渣弃去，取滤液浓缩至相对密度1.05-1.10；再加入乙醇使乙醇体积浓度达到75-80％，0-4℃冷藏静置12-24小时过滤，取 滤液浓缩挥发除去乙醇，样品溶液经过10000-25000转/分钟的高速离心机离心，得到甘草醇沉组分； 

3)过膜：将离心液经过截留分子量3000-6000Da中空纤维膜分离仪分离，操作压力0.05-0.3MPa，截留液弃去，透过液即为膜分离组分； 

4)X-5大孔吸附树脂分离：将膜分离组分上样于X-5大孔吸附树脂柱上，上样量与分离材料体积比为1∶100-500，分别采用水和体积浓度30-50％乙醇作流动相洗脱，每次洗脱的体积为3-6个柱体积，流速为1-3个柱体积/小时；循环洗脱，洗脱液浓缩，浓缩至浓度为0.15-0.6克/毫升，过0.2-0.4微米滤膜，即为甘草苷大孔树脂分离组分； 

5)工业色谱分离：以粒径5-40微米的C18硅胶键合固定相为色谱填料，以甲醇和水为流动相，梯度洗脱，甲醇的体积浓度从0-100％变化，最好从0-70％变化，收集目标组分，冷冻干燥即为甘草苷，将样品进行高效液相分析确定产品纯度。 

所述色谱柱效为5000-20000塔板/米，色谱柱长为200毫米-600毫米，色谱柱内径为20毫米-300毫米；所述树脂柱长为40厘米-100厘米，树脂柱内径为10厘米-20厘米，树脂填料为0.3-1.25毫米的X-5型大孔吸附树脂。 

本发明具有以下优点： 

1.样品纯度高。由于本发明采用了最先进的工业色谱分离制备技术，色谱填料为高分离能力的ODS(C18健合固定相)分离材料，利用工业色谱的高分离能力，可以保证产品的纯度达到98％以上。 

2.重现性好。本发明利用工业色谱系统和ODS稳定的性能，可以保证甘草苷分离制备的重现性和稳定性。 

3.周期短。本发明从原药材的粉碎提取到制备得到甘草苷产品，只需要7天的时间。