[发明专利]一种表告依春的分离制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及天然药物的分离，具体地说是一种表告依春的分离制备方法，通过工业色谱技术从传统中药板蓝根中分离表告依春的制备方法。

背景技术

板蓝根为中国传统中药，《中华人民共和国药典》(2000版)规定为十字花科植物菘蓝(Isatis indigotica Fort.)的干燥根，始载于《神农本草经》，有清热解毒、凉血利咽功能，临床上常用于病毒性及细菌性感染疾病。板蓝根对流感毒、肾综合征出血热病毒(HFRSV)、乙型脑炎病毒、腮腺炎病毒、单纯疱疹病毒、乙型肝炎病毒以及柯萨奇B4病毒均有不同程度的抑制作用(李玲等.药学学报，1994，29(2)：128-131；张宸豪等.第四军医大学吉林医学院学报，2003，23(3)：125-126；刘思贞等.中草药，1999，30(9)：650-651；孙广莲等.山东中医药大学学报，2001，24(2)：137-138；胡兴昌等.上海师范大学学报(自然科学版)，2003，32(1)：62-65；张大志等.药学研究，2001，10(5)：51-52)。还有研究表明板蓝根具有抗菌作用和对细胞内毒素有作用(郑建玲等.中国微生态学杂志，2003，15(1)：18-19；刘云海等.中草药，2003，34(2)：152-154.刘云海等.中国药科大学学报，2003，34(5)：442-447)。板蓝根作为普遍应用的抗病毒中药，具有十分重要的市场价值，但是其物质基础不清晰，有效成分不明确，严重限制了板蓝根药材的应用，迫切需求能够大规模从板蓝根中分离植被有效成分的技术方法。

表告依春，英文名epigoit rin。文献报道表告依春为板蓝根的主要成分(刘海利等.沈阳药科大学学报，2002，19(2)：93-95；徐丽华等.中国天然药物，2005，3(6)：359-360；Huang QS，et al.Planta Medica，1981，42(3)：308-310)，并且具有明显的抗流感病毒活性(徐丽华等.中国天然药物，2005，3(6)：359-360；黄芳等，中国药科大学学报，2006，379(6)：519-522)。文献有关表告依春的提取分离制备的报道，基本上都是采取传统的己烷、二氯甲烷等溶剂萃取、硅胶柱层析、氧化铝柱层析等方法(刘海利等.沈阳药科大学学报，2002，19(2)：93-95；徐丽华等.中国天然药物，2005，3(6)：359-360；Huang QS，et al.Planta Medica，1981，42(3)：308-310)，这些方法存在产品纯度低、重现性差、耗时长、有机残留严重、检测手段落后、自动化程度低、无法大规模生产等缺点。

发明内容

本发明的目的是提供一种产品纯度高、重现性好、周期短，可以大规模生产的表告依春分离制备方法。以满足表告依春化合物标准对照品制备和大规模工业生产的需要。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种表告依春的分离制备方法，

1)提取：称取板蓝根原药材，加入其重量8-12倍的水煎煮提取2-3次，每次1-3小时，得到提取液，将提取液浓缩至相对密度为1.10-1.15的浸膏，得到表告依春提取组分；

2)醇沉：将浸膏中加入乙醇使乙醇体积浓度达到50-70％，0-4℃冷藏静置12-24小时，过滤，滤渣弃去，取滤液浓缩，滤液浓缩至相对密度1.05-1.10；再加入乙醇使乙醇体积浓度达到75-80％，0-4℃冷藏静置12-24小时过滤，滤渣弃去，取滤液浓缩挥发除去乙醇，样品溶液经过10000-25000转/分钟的高速离心机离心，得到表告依春醇沉组分；

3)过膜：将离心液经过截留分子量500-10000Da中空纤维膜分离仪分离，操作压力0.05-0.3MPa，截留液弃去，透过液即为表告依春膜分离组分；

4)非极性大孔树脂分离：将膜分离组分上样于非极性大孔树脂柱，上样量与分离材料体积比为1∶100-500，分别采用流动相体积浓度5-20％的乙醇和40-60％乙醇洗脱，每次洗脱的体积为3-6个柱体积，流速为1-3个柱体积/小时；循环洗脱，洗脱液浓缩，浓缩至浓度为0.1-0.5克/毫升，过0.2-0.4微米滤膜，即为表告依春大孔树脂分离组分；

5)工业色谱分离：以粒径5-20微米的C18硅胶键合固定相为色谱填料，以甲醇和水为流动相，梯度洗脱，甲醇的体积浓度从0-100％变化，最好从0-50％变化，收集目标组分，冷冻干燥即为表告依春。将样品进行高效液相分析确定产品纯度。