[发明专利]简便快速生物活性物质筛选方法

权利要求书

1.一种通过制备无菌培养基小琼脂块，培养待筛选样品的固体发酵方法。其特征在于：制备体积和形状完全一样的无菌培养基小琼脂块，将样品接种于其上培养，可保证每个样品获得的营养一致。

2.一种培养好氧样品用的对培养板板盖进行改造的方法。其特征在于：使用钻子在板盖上打孔，然后在板盖外侧覆盖上一层通气过滤除菌层。

3.一种包括培养和检测的筛选方法，其具体步骤包括：

a.培养阶段

(1)固体培养

适用于适合固体培养的生物。其特征在于：在适合于待筛选物质的培养基中加入适当浓度的适合凝固剂。将培养基在无菌条件下倒在具有水平底部的皿中，由于皿的底部体积可以测量得到，因此，控制倒入的培养基的体积，就可以控制形成的固体培养基平板的厚度。使用灭菌打孔器制备完全一样的小琼脂块，用灭菌镊子将其转移至灭菌培养皿中。使用灭菌牙签，将待筛选的文库中的样品转移接种到小琼脂块上培养，培养条件视待筛选物质的特性而定。

(2)液体培养

适用于适合液体培养的生物。其特征在于：使用多孔细胞培养板，用移液装置将事先除菌的培养液加入，加入量视培养情况而定。使用灭菌牙签，将待筛选的文库中的样品转移接种到培养液中培养，培养条件视待筛选物质的特性而定。如果样品需要通气培养，则事先对培养板板盖按权利要求2所述的方法进行改进。

b.检测阶段

(1)鉴定板检测

其特征在于：将能与待测活性物质反应并能被检测的物质以凝胶状固态的形式铺于透明水平鉴定平板上。如果待测物质以固体琼脂块的方式培养获得，则在无菌条件下将培养后的小琼脂块排列在鉴定板上；如果待测物质以液体培养的方式获得，则使用培养板复制器取微量的培养液，转移到鉴定板上。待测物质与检测物质反应之后，一般能够在待测物质周围形成透明圈、变色圈等等发生颜色改变的区域。使用扫描仪将鉴定板扫描成电子图片，使用计算机图像处理软件识别并区分背景色和颜色改变区域，从而可测量颜色改变区域的尺寸大小和颜色，将获得的数值输入数据统计处理软件，进行统计分析。

(2)酶标仪检测

其特征在于：对于液体培养的物质，将能与待测物质发生颜色反应的检测物质加入到培养液中，混匀反应之后，使用酶标仪测定其在某一波长处的吸光度。

c.保存阶段

其特征在于：将选定的目的菌株转移接种到菌种斜面或者制备菌种冻存管。