[发明专利]抗氧化及预防糖尿病发生的融合蛋白的制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种融合蛋白，尤其是涉及一种抗氧化及预防糖尿病发生的融合蛋白的制备方法及其应用。

背景技术

胸腺素原α(prothymosinα)是一个小的酸性蛋白，相对分子质量13,000，最初由大鼠的胸腺分离得到。虽然胸腺素是由胸腺分泌的，但在体内许多组织都有胸腺素原α的表达，而且是不含内含子的一种保守的DNA序列。胸腺肽的临床应用始于20世纪70年代中期，其最主要的贡献是对胸腺依赖性疾病的治疗，它对于维持原发性免疫缺陷病，自身免疫疾病和癌症患者的免疫反应性，刺激其特异性淋巴细胞的活性起着主要作用，因此广泛应用于治疗系统性红斑狼疮、白塞氏综合征、类风湿性关节炎、重症感染、支气管哮喘、急慢性肝炎和肿瘤等疾病。另外，由于人类的老化明显地反映胸腺组织的萎缩和功能的衰竭，胸腺肽可以推迟一些老年性疾病的出现，因此应用胸腺肽抗衰老也有着极其广阔的前景。

随着研究的深入，人们已经将研究重点转向胸腺素中的单一肽，以期发现更有效的临床治疗药物。文献表明，胸腺素α原(prothymosinα，ProTα)和Tα1是当前胸腺素研究中的热点。

胸腺素原α的前28个肽(Thymosinα1，Tα1)已有许多实验证明它是一种免疫激素，1984年，Haritos(Haritos A A et al.Proc Natl Acad Sci.USA，1984，81：1008)等从大鼠胸腺分离出一种含有111个氨基酸残基的多肽，其N端含已发现的所有胸腺素α，原家族成员的序列，因此命名为胸腺素α原，ProTα是一个小分子蛋白，由109~113个氨基酸残基组成。由111个氨基酸残基组成。人ProTα由109个氨基酸残基组成，它对提高机体免疫力，抗机会感染，促进淋巴细胞的成熟与分化；对IL-2和IL-2R的表达有一定的促进作用；甚至于发现它对肿瘤也有一定治疗作用。

1986年Pan和Haritos(Pan et al.Arch Biochem Biophys 1986；Haritos et al.Proc NatlAcad Sci USA 1986)等发现大鼠ProTA能增强小鼠抗白色念珠菌(Cαndidαα1bicαns)感染的能力，后来又发现ProTα能刺激转移抑制因子(MIF)的释放，其作用比Tα1强10～20倍。

I型糖尿病的重要原因与自身免疫疾病密切相关，其中主要是因为胰岛β细胞受到自身免疫细胞的攻击，造成抗原暴露，引起免疫系统进一步的反应，使得胰岛β细胞大量损失，正常胰岛素的分泌受到影响，血糖升高，形成糖尿病症状。STZ在I型糖尿病模型制备中已经得到广泛应用，大鼠在50mg/kg一次性注射情况下并可以造模成功，而小鼠则在相同剂量经过5次连续注射后基本达到造模目的，目前认为STZ的作用机理是通过使机体产生过量的NO，攻击破坏胰岛β细胞，引起胰岛细胞抗原暴露，激活机体免疫机制，大量巨噬细胞进入胰岛细胞从而加剧胰岛细胞的损伤，最后造成胰岛素分泌减少，引起血糖增高，诱发糖尿病。诱导的小鼠胸腺萎缩，肾脏明显肿大，并且血清抗氧化能力显著下降。

近年来，糖尿病的病因和发病机理研究表明氧化应激与糖尿病的发生和发展密切相关(曹文彬等，抗氧化微量营养素防治糖尿病的研究进展，长春中医药大学学报，2006，22(2)：73-74)，为了防止糖尿病的发生发展，人们对一些具有防治糖尿病作用的天然抗氧化物进行了系统的研究，发现它们通过表达不同的机制与作用环节打断氧化侵袭引致胰岛β细胞损害的恶性循环，从而为天然抗氧化治疗糖尿病提供了一个新的策略。