[发明专利]一种抗肿瘤融合蛋白的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种抗肿瘤融合蛋白的制备方法，其特征在于其包括以下步骤：

1)根据ProTα的基因序列，设计上游引物P1和下游引物P2，上游引物P1和下游引物P2分别为：

上游引物P1：5’-GCGGATCCATGTCAGACGCAGCCGTA-3’，

下游引物P2：5’-GCGAATCCCTAGTCATCCTCGTCGGTC-3’，

将上游引物P1引入BamHI酶切位点，将下游引物P2引入EcoRI酶切位点；

2)采用RT-PCR方法获得前胸腺素α原全长基因cDNA，将PCR产物纯化后与pMD18-TVector连接，重组载体命名为TP，转化DH5α感受态细胞，将鉴定的阳性菌液测序；

3)采用生物学软件DNAman对7个单克隆基因序列和参考的proTα的基因序列进行比对；

4)用EcoRI和BamHI双酶切ProTαPCR产物，将ProTα基因片断插入经同样双酶切的原核表达载体pGEX 6P-1中，命名为PP，转化大肠杆菌BL21，LB培养基，37℃培养，加入IPTG，37℃诱导表达，菌液离心后的沉淀用上样缓冲液溶解，沸水浴后离心取上清，进行SDS-PAGE电泳，获得GST-Proα融合蛋白；

5)将4经过转化的转基因BL21菌株超声破碎后，离心所获得的上清中含有可溶性的融合蛋白GST-Proα；

6)将上清经过GST亲和层析柱分离纯化获得高纯度的GST-Proα融合蛋白。

2.如权利要求1所述的一种抗肿瘤融合蛋白的制备方法，其特征在于在步骤4)中，37℃培养至OD_500nm为0.8时，加入IPTG至终浓度为0.5mmol/L，37℃诱导表达5h。

3.如权利要求1所述的一种抗肿瘤融合蛋白的制备方法，其特征在于在步骤4)中，菌液离心后的沉淀用等体积的上样缓冲液溶解，沸水浴中10min后离心取上清，进行SDS-PAGE电泳。

4.如权利要求1所述的一种融合蛋白在制备抗肿瘤药物中的应用。

5.如权利要求1所述的一种融合蛋白在制备瘤苗免疫佐剂中的应用。