[发明专利]制备κ-角叉菜聚糖酶的方法有效
| 申请号： | 200680054085.5 | 申请日： | 2006-08-29 |
| 公开（公告）号： | CN101415722A | 公开（公告）日： | 2009-04-22 |
| 发明（设计）人： | 雅斯闵·纳杰姆丁·克哈姆布哈提;卡尔帕纳·哈瑞西·莫迪;布哈瓦纳斯·杰哈 | 申请（专利权）人： | 科学和工业研究委员会 |
| 主分类号： | C07K1/34 | 分类号： | C07K1/34;C07K14/21;C12N9/42 |
| 代理公司： | 中原信达知识产权代理有限责任公司 | 代理人： | 杨 青;樊卫民 |
| 地址： | 印度*** | 国省代码： | 印度;IN |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 制备 角叉菜 聚糖 方法 | ||
1.用于制备κ-角叉菜聚糖酶的方法，其中所述方法包括下列步骤：
(i)将登记号为MTCC 5261的耐盐海洋细菌假单胞菌 (Pseudomonas sp.)在30℃培养于液体培养基中28小时以获得培养物， 所述培养基含有0.003g.100ml-1角叉菜聚糖、0.01g.100ml-1酵母提取物、 0.3g.100ml-1氯化钠、0.04g.100ml-1K2HPO4和0.003g.100ml-1KH2PO4， pH6.3；
(ii)将从步骤(i)获得的培养物在8000rpm离心15分钟，获得作为 上清液的无细胞提取液；
(iii)从步骤(ii)获得的上清液中纯化粗酶，是通过用50％硫酸铵在 4℃的温度下处理上清液，将混合物老化24小时的一段时间，然后在 4℃下以8000rpm离心，得到含有κ-角叉菜聚糖酶的沉淀；
(iv)将从步骤(iii)获得的沉淀悬浮在10mM Tris-HCl缓冲溶液中； 和
(v)将在步骤(iv)中获得的悬浮液透析以除去附着的硫酸铵，然后 通过凝胶过滤得到所需的纯化κ-角叉菜聚糖酶。
2.用于制备κ-角叉菜聚糖酶的方法，其中所述方法包括下列步骤：
(i)将登记号为MTCC 5261的耐盐海洋细菌假单胞菌 (Pseudomonas sp.)在30℃培养于液体培养基中28小时以获得培养物， 所述培养基含有0.03g.100ml-1角叉菜聚糖、0.01g.100ml-1酵母提取物、 0.3g.100ml-1氯化钠、0.004g.100ml-1K2HPO4和0.03g.100ml-1KH2PO4， pH8.4；
(ii)将从步骤(i)获得的培养物在8000rpm离心15分钟，获得作为 上清液的无细胞提取液；
(iii)从步骤(ii)获得的上清液中纯化粗酶，是通过用40％硫酸铵在 4℃的温度下处理上清液，将混合物老化24小时的一段时间，然后在 4℃下以8000rpm离心，得到含有κ-角叉菜聚糖酶的沉淀；
(iv)将从步骤(iii)获得的沉淀悬浮在15mM Tris-HCl缓冲溶液中； 和
(v)将在步骤(iv)中获得的悬浮液透析以除去附着的硫酸铵，然后 通过凝胶过滤得到所需的纯化κ-角叉菜聚糖酶。
3.用于制备κ-角叉菜聚糖酶的方法，其中所述方法包括下列步骤：
(i)将登记号为MTCC 5261的耐盐海洋细菌假单胞菌 (Pseudomonas sp.)在35℃培养于液体培养基中28小时以获得培养物， 所述培养基含有0.03g.100ml-1角叉菜聚糖、0.1g.100ml-1酵母提取物、 0.3g.100ml-1氯化钠、0.004g.100ml-1K2HPO4和0.003g.100ml-1KH2PO4， pH5.1；
(ii)将从步骤(i)获得的培养物在8000rpm离心15分钟，获得作为 上清液的无细胞提取液；
(iii)从步骤(ii)获得的上清液中纯化粗酶，是通过用55％硫酸铵在 4℃的温度下处理上清液，将混合物老化24小时的一段时间，然后在 4℃下以8000rpm离心，得到含有κ-角叉菜聚糖酶的沉淀；
(iv)将从步骤(iii)获得的沉淀悬浮在20mM Tris-HCl缓冲溶液中； 和
(v)将在步骤(iv)中获得的悬浮液透析以除去附着的硫酸铵，然后 通过凝胶过滤得到所需的纯化κ-角叉菜聚糖酶。
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