[发明专利]用于调节止血的组合物和方法

权利要求书

1.一种调节止血的包含SEQ ID NO: 1的氨基酸41-179和氨基酸235-488的因子Xa变异体，其中：

a) 在SEQ ID NO: 1的位置235(胰凝乳蛋白酶编号系统中第16位)的Ile被选自Leu、Phe、Asp和Gly的氨基酸取代，

b) 在SEQ ID NO: 1的位置236(胰凝乳蛋白酶编号系统中第17位)的Val被选自Leu、Ala和Gly的氨基酸取代，或

c) 在SEQ ID NO: 1的位置418(胰凝乳蛋白酶编号系统中第194位)的Asp被Asn或Glu取代，

其中所述因子Xa变异体通过活性位点的底物结合低于野生型因子Xa，并且在所述因子Xa变异体在凝血酶原酶复合物中被因子Va结合时增加，和

其中所述因子Xa变异体具有比野生型因子Xa长的血浆半衰期。

2.根据权利要求1所述的因子Xa变异体，其中所述变异体的氨基酸序列由SEQ ID NO: 1的氨基酸41-179和氨基酸235-488组成，其中：

a)在SEQ ID NO: 1的位置235(胰凝乳蛋白酶编号系统中第16位)的Ile被选自Leu、Phe、Asp和Gly的氨基酸取代；

b)在SEQ ID NO: 1的位置236(胰凝乳蛋白酶编号系统中第17位)的Val被选自Leu、Ala和Gly的氨基酸取代；或，

c)在SEQ ID NO: 1的位置418(胰凝乳蛋白酶编号系统中第194位)的Asp被Asn或Glu取代。

3.一种编码根据权利要求1所述的因子Xa变异体的核酸，所述核酸进一步编码细胞内裂解位点，其中所述细胞内裂解位点位于SEQ ID NO: 1的位置234和235 (胰凝乳蛋白酶编号系统的位置15和16)之间或者代替激活肽。

4.根据权利要求1所述的因子Xa变异体，其中在SEQ ID NO: 1的位置235-237 (胰凝乳蛋白酶编号系统的位置16-18)的所述序列选自Leu-Val-Gly、Gly-Val-Gly、Ile-Ala-Gly、Phe-Val-Gly和Ile-Gly-Gly。

5.一种药用组合物，其在生物相容性载体中包含根据权利要求1所述的因子Xa变异体。

6.一种表达载体，包含权利要求3所述的核酸。

7.根据权利要求6所述的载体，其选自：腺病毒载体、腺病毒相关载体、逆转录病毒载体、质粒和慢病毒载体。

8.权利要求1的因子Xa变异体在制备治疗止血相关疾病的药物中的用途。

9.根据权利要求8所述的用途，其中所述变异体是前凝血剂且所述疾病选自：血友病A和B，与抑制抗体相关联的血友病A和B，凝血因子缺乏症，维生素K环氧化物还原酶C1缺乏症，γ羧化酶缺乏症，与外伤、损伤、血栓形成、血小板减少、中风、凝血病、弥散性血管内凝血(DIC)相关联的出血，过度抗凝血治疗疾病，伯-苏综合征，Glanzman血小板无力症以及贮存池缺损。

10.根据权利要求8所述的用途，其中在SEQ ID NO: 1的位置235-237 (胰凝乳蛋白酶编号系统的位置16-18)的所述序列选自Leu-Val-Gly、Gly-Val-Gly、Ile-Ala-Gly、Phe-Val-Gly和Ile-Gly-Gly。

11.根据权利要求1所述的因子Xa变异体，其中SEQ ID NO: 1的位置235 (胰凝乳蛋白酶编号系统的第16位)的Ile被选自Leu、Phe、Asp和Gly的氨基酸取代。

12.根据权利要求1所述的因子Xa变异体，其中SEQ ID NO: 1的位置236 (胰凝乳蛋白酶编号系统的第17位)的Val被选自Leu、Ala和Gly的氨基酸取代。

13.根据权利要求1所述的因子Xa变异体，其中SEQ ID NO: 1的位置418 (胰凝乳蛋白酶编号系统的第194位)的Asp被Asn或Glu取代。

14.根据权利要求1所述的因子Xa变异体，其中SEQ ID NO: 1的位置235 (胰凝乳蛋白酶编号系统的第16位)的Ile被Leu取代。