[发明专利]通过靶特异性杂交捕获方法检测核酸

权利要求书

1.一种检测多个靶核酸中的每一个的方法，其包括：

a）通过将所述多个靶核酸、与所述靶核酸的至少一部分互补的核 酸探针和固体载体混合来将所述多个靶核酸捕获至所述固体载体上，形 成多个富集的靶核酸，其中所述靶核酸及核酸探针一个为RNA另一个为 DNA；

b）扩增富集的核酸或核酸探针，形成多个扩增的靶；和

c）通过将所述多个扩增的靶、与所述扩增的靶的第一部分杂交的 可选择性寡核苷酸，和与所述扩增的靶的第二部分互补的核酸探针混合 形成DNA∶RNA杂交寡核苷酸复合体，来检测所述多个扩增的靶而进行 所述靶核酸的检测，其中DNA∶RNA杂交体通过DNA∶RNA杂交体特异性 结合剂检测，并通过所述寡核苷酸复合体分离进行选择，从而检测所述 多个靶核酸中的每一个。

2.如权利要求1所述的方法，其中在捕获的所述步骤中，所述固 体载体与DNA∶RNA杂交体特异性结合剂结合，由此将所述靶核酸捕获 至所述固体载体上。

3.如权利要求1所述的方法，其中所述DNA∶RNA杂交体特异性结 合剂选自由以下组成的组：DNA∶RNA杂交体特异性抗体、单克隆抗体或 多克隆抗体或其片段、蛋白质、催化失活的核糖核酸酶H，和核酸、核 酸适配子或结合并形成三链体结构的寡核苷酸。

4.如权利要求2所述的方法，其中所述DNA∶RNA杂交体特异性结 合剂为DNA∶RNA杂交体特异性抗体。

5.如权利要求2所述的方法，其中所述DNA∶RNA杂交体特异性结 合剂为与所述靶核酸互补的核酸探针。

6.如权利要求3所述的方法，其中所述DNA∶RNA杂交体特异性结 合剂被可检测地标记。

7.如权利要求6所述的方法，其中所述标记通过比色法、化学发 光、荧光和光散射方法检测。

8.如权利要求1所述的方法，其中所述捕获的靶核酸或核酸探针 通过等温扩增被扩增。

9.如权利要求8所述的方法，其中在所述等温扩增中使用DNA聚 合酶。

10.如权利要求8所述的方法，其中在所述等温扩增中使用随机引 物。

11.如权利要求10所述的方法，其中所述随机引物为五聚体。

12.如权利要求10所述的方法，其中所述随机引物包含疾病特异 性引物序列的子集。

13.如权利要求1所述的方法，其中所述选择性寡核苷酸被结合至 固体载体。

14.如权利要求1所述的方法，其中所述固体载体选自由以下所组 成的组：平板、微平板、微量板、载玻片、皿、微珠、颗粒、微粒、杯 子、条状物、芯片、微芯片、带状物、膜、微阵列和试管。

15.如权利要求14所述的方法，其中所述固体载体的制造材料选 自由以下所组成的组：玻璃、硅、塑料、聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯和 聚碳酸酯。

16.如权利要求14所述的方法，其中修饰所述固体载体以使其包 含：进行修饰以便表面包含羧基、氨基、酰肼、醛基、核酸或核苷酸衍 生物、伯氨基和染料。

17.如权利要求1所述的方法，其进一步包括添加阻断剂探针。