[发明专利]具有降低的免疫原性的抗CD19抗体

说明书

技术领域

本发明一般地涉及改变抗CD19鼠单克隆抗体B4轻链和重链的可变 区，以降低其免疫原性。

发明背景

CD19是在B细胞和某些衍生自B细胞的癌性细胞(例如许多B细胞 淋巴瘤)上发现的表面蛋白质。已经在小鼠中产生抗CD19单克隆抗体， 其在B细胞衍生的癌症的临床前动物模型中显示出一些希望。然而，鼠源 的抗体通常在人中是有免疫原性的。已经开发了许多改变鼠源抗体以最小 化其在人中的免疫原性的策略。一个这样的策略是嵌合化(chimerization)， 涉及将小鼠的可变区融合到人的恒定区。然而，嵌合化之后保留的鼠源的 可变区序列经常是有免疫原性的。另一个这样的策略是人源化，涉及使用 最紧密相关的人源序列置换可变区中的鼠源构架区(FR)，为了保留结合 活性，任选地将某些氨基酸回复突变为对应的小鼠氨基酸。然而，即使是 人源化的抗体也可能是有免疫原性的，因为抗体互补决定区(CDR)通常 含有非自身的B细胞表位和T细胞表位。事实上，即使是完全的人抗体， 也是有免疫原性的；这是在免疫应答过程中形成抗独特型抗体的基础。所 有的这些问题同样可以适用于鼠源抗CD19抗体，正如其适用于任何其它 类型的抗体。因此，针对抗CD19抗体，存在降低其免疫原性的需要。

发明内容

本发明涉及抗CD19鼠单克隆B4抗体，相比较于野生型的B4抗体， 其已被改变以降低免疫原性。更特别地，本发明的B4抗体的可变区被改 变以除去潜在的T细胞表位。作为结果，相比较于野生型B4抗体，本发 明的B4抗体具有改良的生物学性质。

因此，一方面，本发明的特征是包括SEQ ID NO：22的1-30位氨基酸 残基的、定义改变的免疫球蛋白重链构架区的氨基酸序列，其中在X5、 X12、X19、X20、X23和X24位的一个或者多个氨基酸残基如下所述： X5是Q或E；X12是V或K；X19是R或K；X20是L或V；X23是K、 E或D或X24是T或A。根据本发明的这个方面，在X5、X12、X19、 X20、X23或X24位的氨基酸残基中至少一个氨基酸残基不同于如SEQ 1D NO：13的1-30位氨基酸残基所示的未改变的免疫球蛋白重链构架区中对 应位置的氨基酸残基。在一个实施方案中，X23是E或D。

在另一个方面，本发明的特征是包括SEQ ID NO：23的1-14位氨基酸 残基的、定义改变的免疫球蛋白重链构架区的氨基酸序列，其中在X3、 X5、X7和X8位的一个或者多个氨基酸残基如下所述：X3是K或R；X5 是R、T或A；X7是G、D或E或X8是Q或K。根据本发明的这个方面， 在X3、X5、X7或X8位的氨基酸残基中至少一个氨基酸残基不同于如SEQ ID NO：13的36-49位氨基酸残基所示的未改变的免疫球蛋白重链构架区中 对应位置的氨基酸残基。在一个实施方案中，X7是E或D。

在另一个方面，本发明的特征是包括SEQ ID NO：24的1-39位氨基酸 残基的、定义改变的免疫球蛋白重链构架区的氨基酸序列，其中在X6、 X10、X26、X29和X34位的一个或者多个氨基酸残基如下所述：X6是K、 D或E；X10是K、E或D；X26是S、D或E；X29是S或A或X34是 V或T。根据本发明的这个方面，在X6、X10、X26、X29或X34位的氨 基酸残基中至少一个氨基酸残基不同于如SEQ ID NO：13的60-98位氨基 酸残基所示的未改变的免疫球蛋白重链构架区中对应位置的氨基酸残基。 在一个实施方案中，X10是E或D。

根据另一个方面，本发明的特征是包括SEQ ID NO：32的1-23位氨基 酸残基的、定义改变的免疫球蛋白轻链构架区的氨基酸序列，其中在X1、 X3、X7、X10、X11和X19位的一个或者多个氨基酸残基如下所述：X1 是Q或D；X3是V或A；X7是S或E；X10是I或T；X11是M或L 或X19是V或A。根据本发明的这个方面，在X1、X3、X7、X10、X11或 X19位的氨基酸残基中至少一个氨基酸残基不同于如SEQ ID NO：25的 1-23位氨基酸残基所示的未改变的免疫球蛋白轻链构架区中对应位置的氨 基酸残基。在一个实施方案中，X3是A且X7是E。在另一个实施方案中， X1是D；X10是I且X11是L。

在另一个方面，本发明的特征是包括SEQ ID NO：28的24-33位氨基 酸残基的、定义改变的免疫球蛋白轻链互补决定区的氨基酸序列。