[发明专利]用于用具有改善的免疫原性的PRRSV抗原免疫接种动物的方法和组合物

权利要求书

1.在猪中引发针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原的改善 的免疫应答的方法，其包括施用包含编码低糖基化的PRRSV GP5多肽变 体的多核苷酸的组合物，从而引发所述猪针对PRRSV抗原的改善的免疫 应答，在所述变体中相应于在SEQ ID NO：1的参考GP5蛋白中的天冬 酰胺34或天冬酰胺51的至少一个N-联糖基化位点被失活。

2.权利要求1的方法，其中所述多核苷酸包括感染性PRRSV RNA 分子。

3.权利要求1的方法，其中所述多核苷酸包括编码感染性PRRSV RNA 分子的DNA分子。

4.权利要求2或权利要求3的方法，其中所述感染性PRRSV RNA 分子是北美PRRSV衍生物或欧洲PRRSV衍生物。

5.权利要求2的方法，其中所述感染性PRRSV RNA分子是编码低 糖基化的PRRSV GP5多肽变体蛋白的北美PRRSV衍生物，在所述变体蛋 白中相应于在SEQ ID NO：1的参考GP5蛋白中的天冬酰胺34或天冬酰 胺51的至少一个N-联糖基化位点被失活。

6.权利要求5的方法，其中相应于在SEQ ID NO：1中的天冬酰胺 51的N-联糖基化位点被失活。

7.权利要求5的方法，其中相应于在SEQ ID NO：1的参考GP5蛋 白中的天冬酰胺34和天冬酰胺51的2个所述N-联糖基化位点均被失 活。

8.权利要求7的方法，其中2个所述N-联糖基化位点通过用编码 除天冬酰胺外的氨基酸的密码子替换编码所述天冬酰胺34和所述天冬 酰胺51的密码子而被失活。

9.权利要求8的方法，其中所述编码另一种氨基酸的密码子编码 丙氨酸或谷氨酰胺残基。

10.权利要求9的方法，其中所述密码子编码丙氨酸残基。

11.权利要求1的方法，其中所述多核苷酸包括DNA分子，在所述 DNA分子中将在哺乳动物细胞中具有活性的启动子与编码低糖基化的 GP5蛋白的所述多核苷酸有效地连接。

12.权利要求11的方法，其中所述启动子是CMV启动子。

13.权利要求1的方法，其中所述N-联糖基化位点通过用编码除天 冬酰胺外的氨基酸的密码子替换编码所述天冬酰胺51的密码子而被失 活。

14.权利要求13的方法，其中所述编码另一种氨基酸的密码子编 码丙氨酸或谷氨酰胺残基。

15.权利要求1的方法，其中相应于天冬酰胺34的所述N-联糖基 化位点通过用编码除天冬酰胺外的氨基酸的密码子替换编码所述天冬 酰胺34的密码子而被失活。

16.权利要求15的方法，其中所述编码另一种氨基酸的密码子编 码丙氨酸或谷氨酰胺残基。

17.权利要求1的方法，其中所述多核苷酸编码低糖基化的PRRSV GP5多肽变体蛋白，在所述变体蛋白中相应于在SEQ ID NO：1的参考 GP5蛋白中的天冬酰胺34和天冬酰胺51的2个所述N-联糖基化位点均 被失活。

18.权利要求17的方法，其中2个所述N-联糖基化位点通过用编 码除天冬酰胺外的氨基酸的密码子替换编码所述天冬酰胺34和所述天 冬酰胺51的密码子而被失活。

19.权利要求18的方法，其中所述编码另一种氨基酸的密码子编 码丙氨酸或谷氨酰胺残基。

20.权利要求17的方法，其中所述N-联糖基化位点之一通过用编 码除天冬酰胺外的氨基酸的密码子替换编码所述天冬酰胺34或所述天 冬酰胺51的一个密码子而被失活。

21.权利要求1的方法，其中所述组合物通过皮下注射、静脉内注 射、皮内注射、肠胃外注射、肌内注射、无针注射、电穿孔、口服递送、 鼻内递送、口鼻递送、或其任何组合来施用。