[发明专利]作为新的局部用抗出血剂的活化的因子X(FXa)的刺激剂

说明书

发明领域

本发明涉及通过使用FXa刺激剂来局部治疗个体的出血。本发明 是基于脂化的组织因子(TF)表现出新的调节作用的发现，该调节作用 刺激两种形式的FXa，即可溶性FXa及与凝血酶原酶复合物结合的 FXa的所有蛋白水解活性(酰胺水解活性及凝血酶原水解活性)。

发明背景

1.凝血生理学

止血是生物体对出血作出应答的机制，其涉及两种在损伤后立即 起作用且长时间保持活性的过程的参与。第一个过程被称为原发性止 血，其特征在于在血管损伤部位发生血管收缩并形成血小板聚集。第 二个过程称为继发性止血，在此阶段由于不同凝血级联(coagulation cascade)蛋白水解酶的作用，形成纤维蛋白凝块。

血小板聚集在毛细血管止血中起关键作用，这对黏膜皮肤出血特 别重要。相反的，纤维蛋白凝块形成对大血管止血更重要，尤其对内 出血(胃肠道、脑出血等)更重要。在血小板聚集形成过程中，可区分 为下列阶段：(i)血小板黏附至由损伤暴露的内皮下层表面；(ii)释放血 小板的颗粒内容物作为对血小板活化的应答；(iii)血小板聚集造成随后 更多的血小板在损伤部位螯合(sequestering)并集中；以及(iv)纤维蛋白 原及其它凝血蛋白与血小板表面结合，以产生凝血酶并形成纤维蛋白 凝块，该纤维蛋白凝块允许血小板融合并固化，从而使止血凝块稳固。 另外，公知血小板计数对纤维蛋白凝块形成起关键作用；血小板计数 低于20,000每微升会伴随严重的出血事件。

多种辅因子及蛋白水解酶参与凝血过程的第二阶段，它们皆称为 凝血因子，以及这个阶段由多个阶段组成，以由于凝血酶的作用由纤 维蛋白原水解形成纤维蛋白作为结束。另外，凝血酶的产生通过增加 更多的血小板被活化及聚集来增强血小板聚集。凝血酶最先由脱辅基 酶，凝血酶原进行蛋白水解形成。此蛋白水解作用是由与活化的血小 板的表面结合的丝氨酸蛋白酶FXa进行，且只有当其辅因子，活化的 凝血因子V(FVa)及钙离子存在时，此丝氨酸蛋白酶才能够水解凝血酶 原。FXa可由两种单独的途径产生，即内源途径及外源途径。

内源途径由一系列的主要涉及凝血因子VIII(FVIII)、凝血因子 IX(FIX)及凝血因子XI(FXI)的反应组成，其中各个酶原被水解，产生 其活性蛋白酶形式(FVIIIa、FIXa及FXIa)。在各步骤中，新形成的蛋 白水解酶将下一酶原催化活化以相继产生活性形式。在内源途径中所 涉及的不同凝血因子被活化；因此，内源途径中任何蛋白质的缺乏将 以级联方式阻断下一步骤的活化，阻止凝块形成并增加出血趋势。不 同凝血因子的缺乏将造成严重的出血综合征，例如FVIII、FIX或FXI 的缺乏分别造成血友病A、B和C。

在血液凝固的外源途径中，在损伤部位的外膜细胞上暴露的TF 结合循环凝血因子VII/活化的凝血因子VII(FVII/FVIIa)，以形成 TF::FVIIa复合物，以及当钙离子存在时以用作使FX活化的底物。外 源途径目前被认为在血液凝固中是最相关的途径，公认如果发生由血 管损伤导致的出血，则由于外源途径活化涉及TF与其配体-FVII/FVIIa 的相互作用，将启动凝血。

TF::FVIIa复合物在凝血中的另一项作用是用作底物，使得因 FVIIa而发生FX活化。结果，最初不足以使纤维蛋白凝块形成的基础 FXa水平(＜150pM)增加。在其辅因子，FVa及细胞的促凝表面的存在 下，这种基础FXa浓度的增加将能够产生纤维蛋白凝块形成所需要的 凝血酶。目前公认的是一旦血小板被活化，它们在凝血过程起关键作 用。它们提供了富含阴离子磷脂的促凝表面，另一方面它们使储存其 内的FVa及FXa暴露。所有这些都使参与凝血的不同物质在其质膜表 面正确组合，形成公知的凝血酶原酶复合物(其包括FXa、FVa、凝血 酶原及阴离子促凝血性血小板磷脂表面)。

外源途径活化的理论能够解释凝血反应是如何通过TF::FVIIa复 合物开始的。说明TF::FVIIa复合物在凝血过程中的生物相关性的一 个例子，就是弥散性血管内凝血(DIC)综合征。此临床疾病状态与TF 的血管内释放有关，并可出现在严重的临床疾病状态的病程中(休克、 脓毒病、心脏停搏、严重创伤、肝病、大外科、烧伤等)。