[发明专利]产生L－谷氨酸的细菌和用于产生L－谷氨酸的方法

说明书

技术领域

本发明涉及发酵工业，并且本发明涉及使用棒状杆菌型细菌(coryneformbacterium)有效产生L-谷氨酸的方法。

背景技术

通常使用具有产生L-谷氨酸的能力的属于短杆菌属(Brevibacterium)或棒杆菌属(Corynebacterium)等的棒状杆菌型细菌通过发酵来产生L-谷氨酸。为了改进这些棒状杆菌型细菌的生产力，使用从自然界分离的细菌菌株，或它们的人工突变菌株或它们通过基因重组修饰的菌株。

作为通过基因重组技术将产生L-谷氨酸的能力改进的棒状杆菌型细菌，迄今为止已经开发的是将谷氨酸脱氢酶活性、柠檬酸合酶活性和丙酮酸羧化酶活性增强的棒状杆菌型细菌(专利文献1)，将α-酮戊二酸脱氢酶活性、或α-酮戊二酸脱氢酶和异柠檬酸裂合酶活性降低的棒状杆菌型细菌(专利文献2和3)等。

同时，谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)染色体的完整核苷酸序列已经测定(非专利文献1)。然而，其3099个推定的orf中的大约40％与功能已知的其它微生物的基因显示低同源性，其编码功能未知的蛋白质，并且缺失这些基因的影响至今未知。

专利文献1：International Patent Publication WO00/18935

专利文献2：International Patent Publication WO95/34672

专利文献3：Japanese Patent Laid-open(KOKAI，JP-A)No.01-296994

非专利文献1：Appl.Microbiol.Biotechnol.，62(2-3)，pp.99-109(2003)

发明内容

本发明的目的是提供将产生L-谷氨酸的能力改进的棒状杆菌型细菌，和提供使用这种细菌有效产生L-谷氨酸的方法。

本发明的发明人为了达到上述目的进行了多方面研究。结果，他们发现如果在棒状杆菌型细菌中将gluX基因失活，能够改进该细菌产生L-谷氨酸的能力，并且由此完成了本发明。

即，本发明提供以下各项。

(1)具有产生L-谷氨酸的能力的棒状杆菌型细菌，对所述棒状杆菌型细菌进行修饰以使gluX基因失活。

(2)根据(1)的棒状杆菌型细菌，通过将突变引入染色体上的gluX基因或其表达调控区来修饰所述棒状杆菌型细菌，以使gluX基因的表达量降低。

(3)根据(1)或(2)的棒状杆菌型细菌，其中将染色体上的gluX基因破坏。

(4)用于产生L-谷氨酸的方法，所述方法包括：在培养基中培养根据(1)-(3)任一项的棒状杆菌型细菌以产生和积累L-谷氨酸；和从所述培养基中收集L-谷氨酸。

附图简述

图1：显示质粒pBS3的构建方法的图示。

图2：显示质粒pBS4S的构建方法的图示。

图3：显示用于破坏gluX的质粒pBXGXD的构建方法的图示。

优选实施方式描述

在下文中，将详细说明本发明的实施方式。

<1>本发明的棒状杆菌型细菌

用于本发明的棒状杆菌型细菌包括棒杆菌属细菌，和曾经归类于短杆菌属，但是已经重新归类于棒杆菌属的那些细菌(Int.J.Syst.Bacteriol.，41，255(1981))，并且进一步包括属于极其接近棒杆菌属的短杆菌属的细菌。具体实例包括以下：

嗜乙酰乙酸棒杆菌(Corynebacterium acetoacidophilum)

醋谷棒杆菌(Corynebacterium acetoglutamicum)

烷醇棒杆菌(Corynebacterium alkanolyticum)

美棒杆菌(Corynebacterium callunae)

谷氨酸棒杆菌

百合花棒杆菌(Corynebacterium lilium)

栖糖蜜棒杆菌(Corynebacterium melassecola)

嗜热产氨棒杆菌(Corynebacterium thermoaminogenes)(Corynebacteriumefficiens)

力士棒杆菌(Corynebacterium herculis)

二歧短杆菌(Brevibacterium divaricatum)

黄色短杆菌(Brevibacterium flavum)

Brevibacterium immariophilum