[发明专利]有效的神经保护性化合物

说明书

技术领域

本发明涉及神经变性的预防。

背景技术

在本领域中，需要一种用于分子治疗的神经保护性化合物以及一种利用这种化合物预防神经系统和神经细胞变性的方法。

发明内容

一方面，本发明涉及一种神经保护性化合物。具体地说，如本申请中所例示的，所述化合物是神经保护性的，可以对抗安非他命(或苯丙胺)或卡因酸的细胞毒性效应。

在一个实施例中，本发明涉及一种预防神经变性的方法，包括：

a)生成一种重组病毒或质粒载体，该重组病毒或质粒载体包含编码转化生长因子超家族或神经营养因子蛋白中的一员的DNA序列，该DNA序列可操作地连接于启动子；

b)用所述重组载体在体外转染一群培养细胞，得到一个所述培养细胞的种群；以及

c)将所述转染的细胞移植至受损神经附近的区域，使所述DNA序列在受损神经附近的区域内表达从而预防神经变性。

在该方法中，所述转化生长因子可以是骨形态发生蛋白(BMP)。所述BMP可以是BMP-2、BMP-3、BMP-4和BMP-9。在另一个实施例中，在上述方法中的神经营养因子可以是GDNF。

另一方面，所述细胞可以是结缔组织细胞，例如成纤维细胞。所述细胞也可以是神经细胞，例如神经胶质细胞或施万细胞。所述细胞可以是受过照射的。此外，所述神经可以是周围神经。在上述方法中，所述载体可以是病毒载体。所述病毒载体可以是逆转录病毒载体、腺相关病毒载体、腺病毒载体或疱疹病毒载体。

在另一个实施例中，本发明涉及一种预防神经变性的方法，包括在受损神经附近区域给予一种包含BMP蛋白的组合物。在该方法中，所述BMP蛋白可以是BMP-2、BMP-3、BMP-4或BMP-9。

此外，移植前，可将所述细胞群保存在例如液氮下10％的DMSO中。

附图说明

从本文以下的详细描述中，将能更充分地理解本发明，并且所给出的附图仅仅是为了举例说明的目的而非用于限制本发明，其中：

图1示出了在3T3-hBMP细胞中甲基苯丙胺(MAP)诱导的细胞毒性。实体框(closed box)表示未用MAP做任何处理的3T3细胞、3T3-PMT-BMP3或3T3-hBMP4细胞。阴影线框(hatched box)表示用1mM MAP处理过。

图2A-2F示出了对应于图1中所观察细胞的显微镜照片。图2A、2B和2C对应于未用MAP处理的对照3T3细胞、3T3-PMT-BMP3或3T3-hBMP4细胞。图2D、2E和2F分别对应于已用1mM MAP处理过的对照3T3细胞、3T3-PMT-BMP3或3T3-hBMP4细胞，如上面的图1中示出的。

图3示出了在小鼠体内NIH3T3-BMP4对由钾盐镁矾(I.C.V.0.1μg/只)诱导的神经元缺失(neuronal loss)的效果。每一个数值均是4只动物的平均值+/-标准差(mean+/-S.E.M.)。*表示相对于对照p＜0.001。#表示相对于Sal+KA或3T3+KA p＜0.01(利用DMR检测的ANOVA)。

图4A-4D示出了用钾盐镁矾处理过的小鼠神经元缺失的显微镜照片。图4A示出了用对照盐溶液处理的动物的海马CA3横断面；图4B示出了用盐水+钾盐镁矾溶液处理的动物的CA3横断面；图4C示出了注射钾盐镁矾前，仅用NIH3T3处理的动物的CA3横断面；图4D示出了注射钾盐镁矾前，用表达重组BMP4的NIH3T3细胞处理的动物的CA3横断面。

具体实施方式

在本申请中，使用“一个”或“一种”既指单个也指多个对象。

如在本文中使用的，术语“结缔组织细胞”或“结缔组织的细胞”包括存在于结缔组织中的细胞，例如成纤维细胞、软骨细胞和骨细胞(成骨细胞/骨细胞)，它分泌可成胶原的细胞外基质，还包括脂肪细胞(脂细胞)和平滑肌细胞。优选地，所述结缔组织细胞是成纤维细胞、软骨细胞和骨细胞。更优选地，所述结缔组织细胞是成纤维细胞。结缔组织细胞还包括间充质细胞，也称为未成熟的成纤维细胞。人们已经认识到，可以用混合培养的结缔组织细胞以及一种类型的细胞实施本发明。

如在本文中使用的，在受损的神经或神经系统“附近”注射细胞意味着注射位置与损伤区域之间足够接近，以实现预防损伤位置的受损神经细胞变性的有效结果。因此，在受损神经附近注射细胞包括在损伤位置或任何位置，该位置近到足够可使注射细胞表达有效多肽并且所述多肽可直接或间接实现预防神经变性的结果。对于周围神经，特别是脊髓损伤，可以在损伤位置的“上游”进行注射，因为细胞会从损伤位置漏出。