[发明专利]作为选择性吸附IG的色谱吸附剂的[1，2，4]三唑并[I，5－a]嘧啶衍生物

说明书

技术领域

本发明属于生物分子的色谱分离领域。进一步涉及一种包含选择性吸附IgG的新型配体的色谱吸附剂，以及生产所述色谱吸附剂的方法和该吸附剂在亲和层析中的用途。

发明背景

单克隆抗体技术的发展为科学和医学进行研究、诊断和治疗提供了巨大的机遇。单克隆抗体，例如用于体外和体内诊断以及人类疾病免疫治疗。目前，大多数正在开发的生物工程学衍生药物都是以G型单克隆抗体为基础的。

IgG通常根据标准技术在细胞表达体系中大批量地生产。应用最广泛的生产方法包括通过色谱法提纯，由于该方法对化合物的通用性和灵敏性，经常是生物分子的优选提纯方法。

在亲和层析领域，有多个专利和专利申请涉及蛋白A，一种作为配体的结合IgG的细菌金黄色葡萄球菌细胞壁蛋白质。例如，PCT/SE83/00297(Pharmacia Biotech AB)揭示了重组体型的蛋白A，其中在该蛋白A分子中添加一个半胱氨酸残基，以改善其与随后作亲和配体使用的分离基质的偶联。此外，美国专利6,197,927(转让给Genentech公司)揭示了葡萄球菌蛋白A的Z结构域变体，具有与野生型Z结构域相当的IgG结合能力，但具有显著减小的尺寸。而且，蛋白A已被证明对蛋白酶敏感。另外，基于蛋白A的亲和配体已知在酸性和碱性条件下不稳定，这就可能会在纯化过程中产生不希望的配体渗漏，而导致产品污染并损害纯化系统的性能。

在现有技术中，许多专利申请描述了小分子配体具有对IgG的亲和力。

WO 2004039765(Amersham Biosciences AB)描述了基于苯脲骨架的小分子作为含K型轻链的IgG和Fab片段的层析亲和配体的用途。

US 6610630(转让给Ciphergen Biosystems公司)描述了2-巯基咪唑及其衍生物附着于作为拟生物亲和层析培养基的固体载体，以便选择性吸附IgG的用途。

US 6117996(转让给Novo Nordisk A/S)描述了三嗪型结构的制备方法及其在提纯多种蛋白质材料中的用途。

US 20030166002(Chang等)描述了在含有适合与树脂结合的接头的三嗪结构基础上合成和筛选活性化合物。

EP 1500431(Millipore UK，Ltd，UK)涉及一种培养基，包含固体载体和吸附在其上的选自2-氨基苯并咪唑和2-氨基甲基苯并咪唑的一种或多种亲和层析配体。本发明的亲和配体用于IgG的提纯。

尽管存在与IgG结合的蛋白A的替代物，但仍然需要一种新型的更有优越性质的IgG结合配体。这种新的配体将不具备前述缺陷，并优选还具有比迄今建议的配体更优选的结合特性。

发明概述

本发明发现了一种基于与嘌呤相关的结构的小有机分子，当其附着于色谱树脂时，会与IgG发生普通的结合。该有机分子也可以作为IgG纯化过程的亲和配体。

第一方面，本发明涉及一种用于选择性吸附IgG的色谱吸附剂，包含以下化学式

及其对应的烯醇式，

其中

X表示O、S或NH；

R¹表示H、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6烷氧基-C_1-6烷基、Ar、-C(O)NHR³、-C(O)-R³或卤素；

R²表示H、C_1-3烷基或卤素；

R³表示H、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6烷氧基-C_1-6烷基或Ar；

n表示0、1、2或3；

Y表示载体；

Ar表示C_6-10芳基，该基团任选地被选自羟基、氰基、卤素、硝基、C_1-6烷基和烷氧基的一个或多个取代。

本文所用术语“卤素”包括氟、氯、溴、碘。

除非另作说明，本文所定义的烷基以及烷氧基和烷氧烷基的烷基部分，可以为直链的，或当碳原子数足够时(即最少为3)可以为支链的和/或环状的。此外，当碳原子数足够时(即最少为4)，该基团还可以为部分环状的/非环状的。所述烷基，以及烷氧基和烷氧基烷基的烷基部分可以为饱和的，或当碳原子数足够时(即最少为2)，可以为不饱和的。除非另作说明，该基团还可以被一个或多个卤素，特别是氟原子取代。