[发明专利]在转录后水平调节核酸表达的方法和组合物

权利要求书

1.分离的核酸，所述核酸包含：

A)至少一个第一核苷酸序列，其编码目标异源核苷酸序列；和

B)至少两个第二异源核苷酸序列，其中每个第二异源核苷酸序列包含：

i)限定第一内含子的第一组剪接元件，在第二组剪接元件没有活性的情况下，所述第一内含子通过剪接被去除，从而产生赋予生物功能的第一RNA分子；和

ii)限定与所述第一内含子不同的一个或多个内含子的第二组剪接元件，其中在所述第二组剪接元件有活性时，与所述第一内含子不同的所述一个或多个内含子通过剪接被去除，从而不产生RNA分子和/或产生不赋予生物功能的第二RNA分子，其中所述第二异源核苷酸序列选自：

a)在所述第一核苷酸序列中串联的第二核苷酸序列，

b)在所述第一核苷酸序列中相距至少25个碱基对的第二核苷酸序列，

c)在所述第一核苷酸序列中相距至少50个碱基对的第二核苷酸序列，

d)在所述第一核苷酸序列中相距至少75个碱基对的第二核苷酸序列，

e)在所述第一核苷酸序列中相距至少100个碱基对的第二核苷酸序列，

f)在所述第一核苷酸序列中相距至少200个碱基对的第二核苷酸序列，

g)在所述第一核苷酸序列中相距至少300个碱基对的第二核苷酸序列，

h)第二核苷酸序列，其中第一个第二核苷酸序列位于启动子和所述第一核苷酸序列之间，而第二个第二核苷酸序列位于所述第一核苷酸序列中；和

i)第二核苷酸序列，其中第一个第二核苷酸序列位于所述第一核苷酸序列中的可读框和聚腺苷酸尾或聚腺苷酸信号之间，而第二个第二核苷酸序列位于所述第一核苷酸序列的所述可读框中。

2.权利要求1的核酸，其中所述第一核苷酸序列选自以下序列及其任意组合：编码蛋白或肽的核苷酸序列、作为RNA具有酶活性的核苷酸序列(例如RNAi)、编码核酶的核苷酸序列、编码反义序列的核苷酸序列和/或小核RNA(snRNA)。

3.权利要求1或2的核酸，所述核酸包含两个或多个可相同或不同的第一核苷酸序列。

4.权利要求1-3中任一项的核酸，所述核酸包含两个或多个相同的第二核苷酸序列。

5.权利要求1-3中任一项的核酸，所述核酸包含彼此不同的两个或多个第二核苷酸序列。

6.载体，所述载体包含权利要求1-5中任一项的核酸。

7.权利要求6的载体，所述载体选自：非病毒载体、病毒载体和合成生物纳颗粒。

8.权利要求6的载体，所述载体选自：AAV载体、腺病毒载体、慢病毒载体、逆转录病毒载体、疱疹病毒载体、甲病毒载体、痘病毒载体、杆状病毒载体和嵌合病毒载体。

9.细胞，所述细胞包含权利要求1-5中任一项的核酸。

10.细胞，所述细胞包含权利要求6-8中任一项的载体。

11.组合物，所述组合物包含权利要求1-5中任一项的核酸和药学可接受载体。

12.组合物，所述组合物包含权利要求6-8中任一项的载体和药学可接受载体。

13.组合物，所述组合物包含权利要求9-10中任一项的细胞和药学可接受载体。

14.生产蛋白的方法，所述方法包括：

a)使封闭寡核苷酸与权利要求1-5中任一项的核酸在允许剪接的条件下接触，其中所述封闭寡核苷酸封闭第二组剪接元件的成员，导致第一内含子通过剪接被去除，而产生第一RNA；和

b)翻译第一RNA，以生产所述蛋白。

15.产生赋予生物功能的RNA的方法，所述方法包括：

a)使封闭寡核苷酸与权利要求1-5中任一项的核酸在允许剪接的条件下接触，其中所述封闭寡核苷酸封闭第二组剪接元件的成员，导致第一内含子通过剪接被去除，而产生第一RNA；和

b)翻译第一RNA，以产生赋予生物功能的RNA。

16.权利要求14-15中任一项的方法，其中将所述封闭寡核苷酸导入到含所述核酸的细胞中。

17.权利要求16的方法，其中所述细胞处于动物中。