[发明专利]控制基因表达的改良方法

权利要求书

1.以提高的特异性在真核生物中转基因表达的方法，所述方法包括步骤：

a)提供表达构建体，构建体包含在所述真核生物中具有功能并且功能性连接至待表达成为嵌合RNA序列的核苷酸序列上的启动子序列，所述核苷酸序列包含：

i)至少一个能赋予所述真核生物优选表型或有益效果的序列，和

ii)至少一个与所述真核生物中天然表达的microRNA序列基本互补的序列，其中所述microRNA在不希望此种表达的组织中、时间上和/或环境条件下天然表达，但是在希望此种表达的组织中、时间上和/或环境条件下不表达或者基本上较少表达，

其中至少一个序列i)和序列ii)彼此是异源性的，和

b)将所述表达构建体导入真核生物。

2.权利要求1所述的方法，其中所述真核生物是人、动物或植物。

3.权利要求1或2所述的方法，其中与microRNA基本互补的序列位于待表达核苷酸序列中相当于所述序列的5’非翻译区或3’非翻译区的位置。

4.权利要求1或3所述的方法，其中与microRNA基本互补的序列在整个序列内与microRNA序列的互补链具有至少60％的同一性或不超过6个错配。

5.权利要求4所述的方法，其中所述错配在相当于所述microRNA的3’区的区域。

6.权利要求1-5中任何一项所述的方法，其中待表达的核苷酸序列包含编码蛋白质的可读框。

7.权利要求1-5中任何一项所述的方法，其中待表达的核苷酸序列编码选自反义RNA、正义RNA、双链RNA或核酶的功能性RNA。

8.权利要求7的所述方法，其中功能性RNA减弱内源基因的表达。

9.权利要求1-8中任何一项所述的方法，其中microRNA是组织特异性表达的、空间性调节的、发育性调节的和/或由生物或非生物应激因素调节的。

10.权利要求1-9中任何一项所述的方法，其中所述表达构建体是DNA。

11.权利要求1-10中任何一项所述的方法，其中所述表达构建体在质粒中。

12.权利要求1-11中任何一项所述的方法，其中所述启动子选自组成型启动子、组织特异性或组织优先性启动子和诱导型启动子。

13.权利要求1-12中任何一项所述的方法，其中真核生物是植物并且启动子是在植物中具有功能的启动子。

14.权利要求13所述的方法，其中表达的核苷酸序列调节农学性状、疾病抗性、除草剂抗性和/或谷粒特性所涉及的基因的表达。

15.权利要求13或14所述的方法，其中所表达的核苷酸序列调节选自如下基因的表达，所述基因为参与蛋白质、肽、脂肪酸、脂类、蜡类、油类、淀粉、糖、碳水化合物、香料、气味、毒素、类胡萝卜素、激素、聚合物、类黄酮、贮存蛋白、酚酸、生物碱、木质素、单宁类、纤维素、糖蛋白和糖脂合成和/或降解的基因。

16.权利要求13-15中任何一项所述的方法，其中microRNA在植物中具有选自下列的表达谱：

a)基本上组成型表达但在种子中不表达，

b)主要在种子中表达但在其它组织中不表达，

c)干旱或其它非生物应激诱导型表达，

d)植物病原体诱导型表达，

e)时间性表达，和

f)化合物诱导型表达。