[发明专利]猪圆环病毒2型疫苗

说明书

发明领域

本发明涉及产生新的猪圆环病毒2型(Porcine Circovirus Type 2， PCV2)病毒和提供针对该病毒的疫苗。

出于所有目的，将在本文中引用的所有文件(“本文引用文件”) 以及在本文引用文件中引用或参考的所有文件在此通过参考并入本 文。

并非承认本文中引用的多个文件中的任一个为本发明的现有技 术。

发明背景

断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)

PMWS是新出现的影响幼猪和断奶猪的疾病，现在在很多产猪国 流行，对全球养猪产业造成潜在的经济影响。尽管在4-20周龄的猪中 有该疾病的描述(42)，但PMWS主要影响5至18周龄的猪。临床PMWS 迹象包括渐进的体重减轻、呼吸困难、呼吸急促、贫血、腹泻和黄疸。 死亡率可以在1至2％之间变动，在复杂病例中可高至30％。

猪圆环病毒(PCV)最初作为猪肾细胞培养物(PK15 ATCC CCL-33) 的污染物而被鉴定(47)。PCV病毒体为二十面体，无被膜，直径17nm， 具有约1.76kb的单链环状DNA。PCV在分类上属于圆环病毒科 (Circoviridae)圆环病毒属(Circovirus)，其包括其它的动物圆环病毒， 例如鹦鹉喙羽病毒、鹅圆环病毒、金丝雀圆环病毒和鸽圆环病毒(35，38， 50，51，52)。已经识别出两种PCV基因型。PK15细胞来源的PCV被 认为对猪是不致病的(3，48)，并被指定为PCV 1型(PCV1)。血清学观 察表明PCV1在猪体内广泛分布，但没有已知的动物疾病与PCV1相 关。另一方面，PCV 2型(PCV2)现在被认为是与断奶仔猪多系统衰竭 综合征(PMWS)有关的主要传染原(2，6，20)，该疾病自其在1991年在 加拿大出现以来成为新的全球性猪病(1，8)。

PCV2和其作用模式

凋亡为具有特异形态学和生物化学变化的细胞自我破坏的主动生 理学过程(39)。很多病毒将诱导凋亡作为它们天然生活周期的一部分 (39)。一方面，凋亡可能是释放和传播宿主细胞产生的子代病毒体的 重要机制，通过使对病毒剂的炎性或免疫反应降至最低。另一方面， 病毒诱导的凋亡可视为多细胞宿主生物有目的的破坏被感染细胞的防 御机制。大多数导致凋亡细胞死亡的病毒触发caspase(半胱氨酸天冬 氨酸蛋白酶)级联来执行该死亡程序过程。有人提出凋亡为导致天然感 染PMWS的猪中B细胞减少的机制(43)，但是最近报道了相反的结果： 淋巴细胞凋亡在PMWS淋巴样减少损伤的发生中并非普遍现象(24， 37)。

在PCV1或PCV2分离群内总体DNA序列同源性大于90％，但是 PCV1和PCV2分离群之间的同源性为68-76％。已鉴别了两个主要的 PCV开放阅读框(ORF)-ORF1，也称为rep基因，编码与病毒复制有 关的35.7kDa蛋白(26)，和ORF2，cap基因，编码27.8kDa的主要免 疫原性衣壳蛋白(9，30，31)。除了复制酶ORF1和衣壳蛋白ORF2，通 过计算机搜索预计还含有其它五个编码大于5kDa蛋白的潜在ORF (27)。这些潜在ORF是否被表达以及表达的蛋白是否为病毒复制所必 需还有待阐明。

对于PCV2，这五个ORF中最大的是长度315bp的片段，这里称 为ORF3，其没有显示出与任何已知蛋白的相似性。相反，位于PCV1 的对应区域内的ORF片段为612bp长，远大于PCV2中的ORF3。此 外，在PCV2的ORF3和PCV1的对应区域之间仅有61.5％的氨基酸 一致性。这种变异是否与PCV2的病原性有关还有待确认。

PMWS患病猪的组织病理学发现和疾病特征提示，在一些情况下， PCV2可能是猪继发性免疫缺陷的诱因。PMWS患病猪中显微损伤的 特征是滤泡和滤泡间细胞区域的淋巴细胞减少，以及淋巴组织的巨噬 细胞渗透。此外，其它传染原与PCV2的共同感染增加了该疾病的发 生率和严重性。(2，3)

由于死亡率在一些农场仍然相当高，目前PMWS在全球养猪业中 仍是重要问题。尽管在开发针对PCV2的DNA疫苗或亚单位疫苗方面 有些资料，但是针对某些病原体的活减毒疫苗的潜在和保护效力仍应 是重要考虑内容。现在仍未知在防止该疾病散布方面有效的减毒活疫 苗。