[发明专利]通过调节缔合制备多肽的方法

权利要求书

1.多肽突变体的制备方法，上述突变体中在形成多肽内界面的氨基酸残基中具有突变以调节多肽的缔合，该制备方法包括：(a)自原始核酸中修饰编码氨基酸残基的核酸以抑制多肽内的缔合，上述氨基酸残基形成多肽内的界面；(b)培养宿主细胞，使其表达上述核酸；(c)自宿主细胞培养物中回收该多肽。

2.异源多聚体的制备方法，上述异源多聚体中形成多肽间界面的氨基酸残基中具有突变以调节异源多聚体的缔合，该制备方法包括：(a)自原始核酸中修饰编码氨基酸残基的核酸以抑制多肽间的缔合，上述氨基酸残基形成多肽间的界面；(b)培养宿主细胞，使其表达上述核酸；(c)自宿主细胞培养物中回收该异源多聚体。

3.权利要求1的方法，该方法是在能够形成多种构象异构体的多肽中，自原始核酸中修饰编码氨基酸残基的核酸以抑制形成一种以上构象异构体的多肽的缔合，上述氨基酸残基形成多肽内的界面。

4.权利要求2的方法，该方法是在能够形成多种多聚体的异源多聚体中，自原始核酸中修饰编码氨基酸残基的核酸以抑制形成一种以上多聚体的多肽间的缔合，上述氨基酸残基形成多肽间的界面。

5.权利要求1或2的方法，其中步骤(a)的修饰为修饰原始核酸以向该界面导入氨基酸残基的突变，使形成界面的多个氨基酸残基带有同种电荷。

6.权利要求5的方法，其中导入的氨基酸残基为谷氨酸(E)。

7.权利要求5的方法，其中导入的氨基酸残基为天冬氨酸(D)。

8.权利要求5的方法，其中导入的氨基酸残基为赖氨酸(K)。

9.权利要求5的方法，其中导入的氨基酸残基为精氨酸(R)。

10.权利要求5的方法，其中导入的氨基酸残基为组氨酸(H)。

11.权利要求1或2的方法，其中步骤(a)的修饰为修饰原始核酸以向该界面导入氨基酸残基的突变，使存在于界面的形成疏水核的氨基酸残基成为荷电氨基酸残基。

12.权利要求11的方法，其中导入的氨基酸残基为谷氨酸(E)。

13.权利要求11的方法，其中导入的氨基酸残基为天冬氨酸(D)。

14.权利要求11的方法，其中导入的氨基酸残基为赖氨酸(K)。

15.权利要求11的方法，其中导入的氨基酸残基为精氨酸(R)。

16.权利要求11的方法，其中导入的氨基酸残基为组氨酸(H)。

17.权利要求1或2的方法，其中多肽的界面由抗体的重链可变区和轻链可变区形成。

18.权利要求1或2的方法，其中多肽的界面由多种重链可变区形成。

19.权利要求1或2的方法，其中多肽的界面由抗体的重链恒定区和轻链恒定区形成。

20.权利要求1或2的方法，其中多肽的界面由多种重链恒定区形成。

21.权利要求1的方法，其中多肽为多个重链可变区和多个轻链可变区通过接头连接的单链多肽。

22.权利要求2的方法，其中异源多聚体为包括多种重链可变区和多种轻链可变区的多特异性抗体。

23.权利要求22的方法，其中异源多聚体为双特异性抗体。

24.利用权利要求1或2的方法制备的多肽突变体或异源多聚体。

25.多肽突变体，其包含原始多肽内形成界面的氨基酸残基的修饰，以抑制上述多肽内的缔合。

26.异源多聚体，其包含原始多肽间形成界面的氨基酸残基的修饰，以抑制上述多肽间的缔合。

27.权利要求25的多肽突变体，其中原始多肽能够形成多种构象异构体。

28.权利要求26的异源多聚体，其中原始多肽能够形成多种多聚体。

29.权利要求25的多肽突变体或权利要求26的异源多聚体，其中上述形成多肽界面的氨基酸残基的修饰为向该界面导入氨基酸残基的突变，使形成界面的多个氨基酸残基带有同种电荷。