[发明专利]抗-CD16结合分子

说明书

本发明涉及能特异性结合于在自然杀伤(NK)细胞和巨噬细胞表面表达的人FcγIII受体(即FcγRIIIA)的结合分子，且尤其是，特异地结合于A型FcγRIII而不与B型FcγRIII结合的结合分子，以及该结合分子在疾病诊断和治疗中的应用。本发明进一步涉及编码此类结合分子的多核苷酸，包含所述多核苷酸的宿主细胞以及利用所述宿主细胞制备本发明结合分子的方法。

技术领域

本发明涉及能特异性结合于在自然杀伤(NK)细胞和巨噬细胞表面表达的人FcγIII受体(即FcγRIIIA)的结合分子，且尤其是，特异地结合于A型FcγRIII而不与B型FcγRIII结合的结合分子，以及该结合分子在疾病诊断和治疗中的应用。本发明进一步涉及编码此类结合分子的多核苷酸，包含所述多核苷酸的宿主细胞以及利用所述宿主细胞制备本发明结合分子的方法。

背景技术

CD16(也称作FcγRIII)，一种对某些与抗体依赖细胞毒性(ADCC)有关的IgGs的Fc片段具有低亲和性的受体，该受体是得到最好表征的负责引发NK细胞对靶细胞的溶解的膜受体(Mandelboim等，1999，PNAS 96：5640-5644)。人NK细胞包括大约15％的淋巴细胞，其由表达CD56而不表达CD3的表型确定(Robertson和Ritz，1990，Blood 76：2421-2438)。大多数(约90％)人NK细胞中CD56的表达量低(CD56^dim)，而高水平地表达FcγRIII(CD16)的(Cooper等，2001，Trends Immunol.22：633-640)。人FcγRIII具有FcγRIIIA和FcγRIIIB两种亚型，它们的胞外免疫球蛋白结合区域序列具有96％的序列同一性(van de Winkel和Capel，1993，Immunol Today 14(5)：215-221)。

FcγRIIIA是在巨噬细胞、肥大细胞以及NK细胞上表达的跨膜受体。在NK细胞上，FcγRIIIA的α链与含有FcεRIγ-链的免疫受体酪氨酸激活基序(ITAM)和/或T细胞受体(TCR)/CD3ζ-链结合于信号转导(Wirthmueller等，1992，J.Exp.Med.175：1381-1390)。在NK细胞中发现了FcγRIIIA与γ和ζ链的同型和异型二聚体的不同组合的互作，这就提供了在NK细胞中存在通过FcγRIIIA复合物变异 体引起的不同信号通路的可能性(Anderson等，1990，PNAS 87(6)：2274-2278；Ackerly等，1992，Int.J.Cancer Suppl.7：11-14)。

FcγRIIIB作为糖基-磷脂酰肌醇(GPI)-锚受体(FcγRIIIB亚型)存在于多核粒细胞(PMN)上，该受体不能引发对肿瘤细胞的杀伤作用(van de Winkel和Capel，1993，supra)。此外，FcγRIIIB以可溶性的受体存在于血清中，其在体内一旦与抗体结合就可能通过形成免疫复合体而引起副作用。

研究表明FcγR-表达效应细胞通过ADCC作用来破坏肿瘤细胞。因此引起了几种通过利用FcγR的活性来治疗癌症的免疫治疗方法的发展，如肿瘤单克隆抗体能够通过与FcγRs结合诱发ADCC效应来介导破坏肿瘤细胞，具有肿瘤细胞特异性以及粒性白细胞FcγRI或NK细胞FcγRIII特异性的双特异分子被利用来改善效应细胞复原(van Spriel等，2000Immunol.Today，21：391-397)。

作为细胞先天免疫性的介质，NK细胞是专业的细胞杀手，与T细胞不同，NK细胞趋向存在于组成性激活状态，不需要额外的(预-)刺激。相反地，静止的细胞毒T细胞需要通过与MHC抗原复合物结合以及后续通过CD28的共刺激来激活。因此，在所有的免疫效应细胞中，NK细胞是用于免疫治疗的较吸引人的候选细胞之一，并且现已开发了对CD16(FcγRIII)和HER-2/neu或CD16和CD30具有特异性的双特异性抗体(Arndt等，1999 Blood 94：2562-2568；McCall等，2001 J.Immunol.166：6112-6117)。