[发明专利]通过合理修饰互补决定区残基使免疫球蛋白可变区人源化的方法

权利要求书

1.免疫球蛋白(Ig)可变区的人源化方法，所述可变区包含：a)来自受体Ig可变区的可变区框架(FR)氨基酸残基和b)来自非人供体Ig可变区的互补决定区(CDR)，所述方法包括，

i)提供能预测至少一个CDR的三维构象的信息；

ii)鉴定出预计影响所述至少一个CDR的三维构象的FR氨基酸残基；

iii)鉴定出至少一个可用选定氨基酸残基取代的候选供体CDR氨基酸残基，其中所述选定氨基酸残基在构象上适应供体Ig可变区与受体Ig可变区之间的FR氨基酸残基差异且不影响该CDR的构象；和

iv)用所述选定氨基酸残基取代所述至少一个候选供体CDR氨基酸残基，形成人源化Ig可变区。

2.权利要求1的方法，其中步骤(iii)还包括，鉴定出至少一个可以用第二种选定氨基酸残基取代的候选受体FR残基，其中所述第二种选定氨基酸残基在构象上适应供体Ig可变区与受体Ig可变区之间的FR氨基酸残基差异且不影响该CDR的构象。

3.权利要求2的方法，其中步骤(iv)还包括，用第二种选定氨基酸残基取代至少一个候选受体FR残基。

4.权利要求1的方法，其中步骤(i)包括评价该非人供体Ig可变区的三维(3D)结构。

5.权利要求1的方法，其中步骤(i)包括评价该非人供体Ig可变区的x-线衍射数据。

6.权利要求1的方法，其中步骤(i)包括评价该非人供体Ig可变区的计算机模型。

7.设计人源化Ig可变区的方法，所述可变区包含：a)来自受体Ig可变区的可变框架区(FR)和b)来自非人供体Ig可变区的互补决定区(CDR)，所述方法包括，

(a)鉴定出在受体Ig可变区和供体Ig可变区之间不同的框架区(FR)氨基酸；

(b)鉴定出与步骤(a)所鉴定的FR氨基酸邻接的氨基酸；

(c)从步骤(b)所鉴定的氨基酸中，鉴定出至少一个可以用选定氨基酸残基取代的候选氨基酸，所述选定氨基酸残基在构象上适应步骤(a)所鉴定的FR氨基酸。

8.权利要求7的方法，其中步骤(a)所鉴定的FR氨基酸是规范FR残基。

9.权利要求7的方法，其中步骤(b)所鉴定的氨基酸与步骤(a)所鉴定的FR氨基酸紧邻。

10.权利要求7的方法，其中步骤(b)所鉴定的氨基酸在与步骤(a)所鉴定的FR氨基酸相距约4的3D空间范围内。

11.权利要求7的方法，其中选定氨基酸残基通过侧链改装鉴定。

12.权利要求11的方法，其中选定氨基酸残基是从所有可能氨基酸的所有可能转异构体选出的。

13.权利要求11的方法，其中选定氨基酸残基是从所有可能氨基酸的所有可能转异构体的子集选出的。

14.权利要求7的方法，其中选定氨基酸残基被鉴定为，在一组具有与步骤(a)所鉴定的FR氨基酸相同的FR氨基酸的同源抗体可变区序列中，所述候选氨基酸的位置上最常见的氨基酸。

15.权利要求11的方法，其中子集包含，在一组具有与步骤(a)所鉴定的FR氨基酸相同的FR氨基酸的同源抗体可变区序列中位于所述候选氨基酸的位置上的最常见的氨基酸的所有可能旋转异构体。

16.权利要求7的方法，还包括在所述候选氨基酸位置取代所述选定氨基酸残基。

17.设计人源化Ig可变区的方法，包括，

a)选择非人供体Ig可变区；

b)选择受体Ig可变区；

c)在所述供体Ig可变区中鉴定出至少一个可用选定氨基酸残基取代的候选CDR氨基酸残基，其中：

(i)所述候选CDR氨基酸残基紧邻所述受体Ig可变区的FR氨基酸残基；或

(ii)所述候选CDR氨基酸残基预计具有一种侧链原子、并预计与所述人源化Ig链的至少一个可变区FR氨基酸残基相互作用，其中所述侧链原子的范德华表面是在免疫球蛋白3D模型中与所述受体Ig可变区的FR氨基酸残基相距约4的范围内。