[发明专利]分离植物和动物来源的药理学活性成分的方法

说明书

本发明涉及从动物或植物来源分离和纯化药理学上令人关注的天然化合物的方法。

更具体地，本发明涉及以与无机酸轭合的形式例如硫酸酯形式或以糖基化形式存在于所述来源中的亲水性和水溶性化合物的提取。

该方法包括将含有所述化合物的来源吸附在高亲脂性树脂上，然后解吸附并回收洗脱物。

可通过本发明的方法获得的化合物的优选实例包括具有各种治疗或预防性药理学活性如抗氧化和抗肿瘤活性的植物雌激素(异黄酮)、完全与动物或植物来源的甾体、多酚结构轭合的雌激素。

可通过本发明的方法以高纯度和重现性获得的化合物可用于制备药物或食品补充剂，用于治疗原发性病变如子宫和前列腺肿瘤和急性或慢性炎症和源自异常生理状况(paraphysiological condition)的病变如经前期综合征和与衰老和/或激素改变有关的紧张、骨质疏松和动脉粥样硬化。

技术背景

存在许多基于植物治疗提取物的食品补充剂，根据所使用的提取技术，其组成和重现性有显著变化。这些变化主要涉及与所需产物不同的产物的存在。因而，所述提取物不能用作药物，因为它们不满足组成一致和不存在其它组分的强制要求。

WO 93/23069、WO 99/43335和EP 1174144公开了含有染料木素、大豆黄素、刺芒柄花素和鹰嘴豆芽素A混合物的大豆或三叶草提取物。

EP 1174144要求保护提取异黄酮苷元(isoflavone aglycone)的方法，特别是从红车轴草(Trifolium pratensis)中提取异黄酮苷元的方法，该方法是：在水中浸渍干燥的、粉碎细的植物原料，然后通过加入水可混溶性溶剂(通常为乙醇)进行提取；分离植物残余物；用脂肪族烃处理水溶液以除去蜡和脂肪；分离各相并取出烃相；在真空中蒸馏水可混溶性有机溶剂，得到固体(水不溶性异黄酮苷元)，将其过滤并干燥。用HPLC测定的苷元含量为19.5％至38％w/w，而基于起始原料的产率为0.6％至2.2％。

WO 93/23069公开了富集异黄酮植物雌激素的组合物，其是通过用水：水溶性有机溶剂(例如乙醇)混合物提取干燥的植物原料、分离水-有机提取液、蒸馏除去有机溶剂并浓缩水相而获得的。

WO 99/43335公开了含有异黄酮的三叶草提取物的制备，该提取物的特征在于存在“芳族生色团”(染料木素、大豆黄素、刺芒柄花素和鹰嘴豆芽素A)。提取操作方法基本上与WO 93/2306中所述的相同，但是含有用HPLC进一步纯化/分离异黄酮的步骤。

在动物生理流体如来自妊娠动物的尿的情况下，描述的制备轭合雌激素混合物的方法是：使用不同的半极性的但是显著亲水的非离子吸附树脂如Amberlites、Diaion Sepabeads或HPD-500。例如，US5723454公开了从妊娠母马尿中提取轭合雌激素的方法，其中预先通过砂床过滤、通过离心或通过超滤被澄清的尿被暴露(通过在混悬液中接触或通过在柱上渗滤)于具有中等极性(偶极矩为1.5至2.0德拜)和400-500m²/g的比表面积的Amberlites非离子树脂(交联聚丙烯酸酯，例如Rohm & Haas的XAD-7)。将树脂用碱水反复洗涤，然后通过用碱水：可混溶性有机溶剂混合物洗脱回收雌激素混合物，通过在真空中浓缩并干燥以固体形式获得雌激素混合物。

US 2005/0014738、US 2003/0105344和US 2004/0072812公开了相同的轭合雌激素的吸附/解吸附方法，也使用了中等极性、主要亲水的树脂如DowexXAD2、Dowex、Optipore。US 2002/0156303描述了也具有中等极性的DiaionHP-20和SepabeadsSP-700(Mitsubishi)树脂的应用。CN 1308038利用了具有相似特性的Hebej CangzhouChemical Factory生产的半极性树脂HPD-500。吸附的物质的接触和提取步骤也相似。

所有所述方法均基于使用非离子的中等极性的主要亲水的树脂，其具有差的吸附选择性，因此产生轭合和非轭合雌激素以及显著量的甲酚衍生物的混合物。这涉及在吸附后的一系列纯化步骤，由于非轭合雌激素或其它多酚杂质的含量不可接受，有时甚至淘汰掉已处理的批次。

因此，显然需要具有重现性的方法以克服以上提及的问题，使得动物和植物来源的轭合物的组成恒定且不含非轭合产物或其它杂质。

发明内容