[发明专利]增强表达的内含子序列

权利要求书

1.用于鉴定具有在植物中增强表达特性的内含子的方法，包括从植物基因组中选择内含子，其中所述的内含子具有至少如下特征：

I)内含子长度短于1000碱基对，并且

II)存在包含二核苷酸序列5′-GT-3′(SEQ ID NO：78)的5′剪接位点，并且

III)存在包含三核苷酸序列5′-CAG-3′(SEQ ID NO：79)的3′剪接位点，并且

IV)在3′剪接位点的上游存在类似于共有核苷酸序列5′-CURAY-3′(SEQ ID NO：75)的分支点，并且

V)从5′剪接位点向下游100个核苷酸范围至少40％的腺嘌呤加胸腺嘧啶含量，并且

VI)从3′剪接位点向上游100个核苷酸范围至少50％的腺嘌呤加胸腺嘧啶含量，并且

VII)整个内含子范围至少50％的腺嘌呤加胸腺嘧啶含量和至少30％的胸腺嘧啶含量。

2.用于在植物内含子群体中富集具有在植物中增强表达特性的内含子的数目至所述群体的至少50％的方法，所述的方法包括从所述群体内选择内含子，其中该内含子具有至少如下特征：

I)内含子长度短于1000碱基对，并且

II)存在包含二核苷酸序列5′-GT-3′(SEQ ID NO：78)的5′剪接位点，并且

III)存在包含三核苷酸序列5′-CAG-3′(SEQ ID NO：79)的3′剪接位点，并且

IV)在3′剪接位点的上游存在类似于共有核苷酸序列5′-CURAY-3′(SEQ ID NO：75)的分支点，并且

V)从5′剪接位点向下游100个核苷酸范围至少40％的腺嘌呤加胸腺嘧啶含量，并且

VI)从3′剪接位点向上游100个核苷酸范围至少50％的腺嘌呤加胸腺嘧啶含量，并且

VII)整个内含子范围至少50％的腺嘌呤加胸腺嘧啶含量和至少30％的胸腺嘧啶含量。

3.如权利要求1或2的方法，其中具有在植物中增强表达特性的所述内含子选自：

a)位于编码蛋白质的两个外显子之间的内含子，和

b)位于相应基因的5′非翻译区内部的内含子。

4.如权利要求1至3中任意一项所述的方法，其中具有在植物中增强表达特性的所述内含子衍生自这样一种基因，即该基因来自在使用植物细胞、植物组织或完整植物所开展的基因表达分析实验中代表着10％部分的具有最高表达速率的基因的一组基因。

5.权利要求2所述的方法，其中所述的植物内含子群体包含在基因组DNA序列数据库或植物基因组DNA文库内所代表的植物基因组的基本上全部内含子。

6.如权利要求1至5中任意一项所述的方法，其中用于鉴定或富集具有在植物中增强表达特性的所述内含子的基因序列信息存在于DNA序列数据库内，并且用于鉴定或富集具有在植物中增强表达特性的所述内含子的选择步骤使用自动化方法开展。

7.如权利要求6的方法，其中自动化方法使用计算机装置和算法完成，其中所述算法定义了实现用于鉴定或富集具有在植物中增强表达特性的所述内含子的选择步骤所需要的指令。

8.计算机算法，其定义了实现用于如权利要求1至7中任意一项所述的鉴定或富集具有在植物中增强表达特性的内含子的选择步骤所需要的指令。

9.计算机装置或数据存储装置，包含权利要求8所述的算法。

10.用于分离、提供或产生具有在植物中增强表达特性的内含子的方法，包括步骤：

a)开展如权利要求1至7中任意一项所述的鉴定或富集具有在植物中增强表达特性的内含子，并提供已鉴定或已富集的所述内含子的序列信息，和

b)提供在a)中已鉴定或已富集的所述内含子的物理核苷酸序列，和

c)评估在b)中所提供内含子序列在体内或体外表达实验中增强基因表达的特性，和

d)分离来自所述表达实验c)的表现增强表达特性的内含子。

11.权利要求10所述的方法，其中所述的评估增强表达特性在植物细胞中完成并且其中所述的分离的内含子增强表达至少两倍。