[发明专利]可在肠杆菌科中自主复制的新质粒

说明书

技术领域

本发明涉及新质粒，其可在来自肠杆菌科(family Enterobacteriaceae)的微生物中自主复制，本发明还涉及使用该质粒和含有该质粒的微生物的方法。

背景技术

目前，正在进行通过DNA重组技术对来自肠杆菌科的微生物，包括大肠杆菌的培育和改进。为了通过DNA重组技术培育和改进微生物，常常使用源自不同属微生物的质粒和广谱宿主载体(broad host spectrum vector)。然而，一般使用来自具有相似特性的微生物的质粒。

源自肠杆菌科的微生物的质粒包括小质粒例如pBR322、均源自大肠杆菌的RSF1010(Gene，vol.75，(2)pp.271-288，1989)和pUC(Gene，Oct.1982，19(3)：259-68)、源自沙门氏菌属(Salmonella)细菌的pHCM2(Plasmid，May 2002，47(3)：159-71)、均源自耶尔森氏菌属(Yersinia)细菌的pCD1(Infect.Immun.，Mar.1986，51(3)：788-94)和pMT1(J.Bacteriol.，Jul.2000，182(14)：3924-8)等。尽管已知pS来自泛菌属(Pantoea)细菌(WO98/59054)，然而当转入微生物中时，能够在酸性条件下改进微生物生长的质粒是未知的。

发明内容

本发明的目的是提供新质粒，其用于培育和改进属于肠杆菌科的微生物。

本发明的发明人发现Pantoea ananatis AJ13601(FERM BP-7207)含有新质粒，并且成功地鉴定了这种质粒。因此，他们完成了本发明。

本发明的一个目的是提供源自微生物的基因，所述微生物选自下组：泛菌属细菌、欧文氏菌属(Erwinia)细菌和肠杆菌属(Enterobacter)细菌，并且其中所述基因编码具有氨基酸序列的Rep蛋白，所述氨基酸序列选自下组：SEQID NO：2和与SEQ ID NO：2至少80％同源的氨基酸序列。

本发明的另一个目的是提供质粒，其包含如上定义的基因，并且其中所述质粒在肠杆菌科细菌中可自主复制。

本发明的另一个目的是提供如上所述的质粒，其中所述质粒还包含标记基因。

本发明的另一个目的是提供如上所述的质粒，其中该质粒来自选自下组的泛菌属细菌：Pantoea ananatis FERM BP-7207、BP-6614和BP-6615，并且该质粒为大约320kbs。

本发明的另一个目的是提供如上所述的质粒，其中该质粒是pEA320，并且具有选自图1、2、3、4和5中所示的限制酶图谱。

本发明的另一个目的是提供肠杆菌科微生物，已将其用包含基因的质粒转化，该基因分离自选自下组的微生物：泛菌属细菌、欧文氏菌属细菌和肠杆菌属细菌，并且其中所述基因编码具有氨基酸序列的Rep蛋白，所述氨基酸序列选自下组：SEQ ID NO：2和与SEQ ID NO：2至少80％同源的氨基酸序列。

本发明的另一个目的是提供如上所述的微生物，其中所述质粒来自选自下组的泛菌属细菌：Pantoea ananatis FERM BP-7207、BP-6614和BP-6615，并且该质粒为大约320kbs。

本发明的另一个目的是提供如上所述的微生物，其中该质粒是pEA320，并且具有选自图1、2、3、4和5中所示的限制酶图谱。

本发明的另一个目的是提供如上所述的微生物，其中所述质粒还包含标记基因，并且该质粒在肠杆菌科微生物中可自主复制。

本发明的另一个目的是提供如上所述的微生物，其中所述肠杆菌科微生物选自下组：埃希氏菌属细菌、泛菌属细菌、肠杆菌属细菌、欧文氏菌属细菌、克雷伯氏菌属(Klebsiella)细菌、沙雷氏菌属(Serratia)细菌、沙门氏菌属细菌和摩根氏菌属(Morganella)细菌。

本发明的另一个目的是提供如上所述的微生物，其能够产生有用的物质。

本发明的另一个目的是提供用于产生有用的物质的方法，其包括在培养基中培养如上所述的微生物，并且从该培养基或微生物中收集所述有用的物质。

本发明的另一个目的是提供如上所述方法，其中有用的物质是L-氨基酸。

本发明的另一个目的是提供用于产生具有改进的耐酸性的微生物的方法，其包括用如上所述的质粒转化肠杆菌科微生物。

本发明的另一个目的是提供如上所述方法，其中具有改进的耐酸性的微生物与不含有该质粒的菌株相比，在pH 3-5显示改善的生长。

附图简述