[发明专利]绿脓假单胞菌IATS O11血清型脂多糖（LPS）特异性人单克隆抗体

说明书

发明领域

本发明涉及一种绿脓假单胞菌IATS O11血清型特异性人单克隆抗 体、产生该抗体的杂交瘤、编码该抗体的核酸、和用该核酸转染的宿 主细胞。而且，本发明涉及产生所述单克隆抗体的方法。另外，本发 明涉及包括至少一种抗体或至少一种编码所述抗体的核酸的药物组合 物。

背景技术

绿脓假单胞菌是一种发现于淡水和土壤的普遍存在的革兰氏阴性 环境细菌。它是一种典型的条件致病菌，通常不会对免疫力完整的宿 主造成威胁，免疫力完整的宿主通过调理抗体和吞噬作用将其清除。 但囊性纤维化患者和免疫缺失个体——包括烧伤患者、ICU中被插管 的患者、癌症和AIDS患者以及接受器官移植的患者——发生医院内感 染的风险特别高。在全部医院内感染中绿脓假单胞菌与耐甲氧西林金 黄色葡萄球菌(MRSA)和万古霉素耐药肠球菌(VRE)所占的比例高达34 ％，医院内感染已经从1975年的7.2/1000患者·天增加至1995年的 9.8/1000患者·天。最经常观察到的医院感染的形式是血流感染和肺炎。

为防止囊性纤维化患者的慢性绿脓假单胞菌感染，已经建立了用 于主动免疫的由结合有绿脓假单胞菌脱毒毒素A的绿脓假单胞菌的8 种最相关的LPS血清型组成的八价结合疫苗。对该疫苗的长期研究已 经表明，18岁时临床感染的患者的比例从约72％降低至32％。但是， 主动免疫接种仅对于免疫力完整的患者以及在可预测的情况下才是有 可能进行的。因此，大多数绿脓假单胞菌患者不能用八价疫苗进行主 动免疫。由于这一点，并且由于大多数绿脓假单胞菌菌株耐受多种药 物这一事实，需要有一种可选择的治疗手段来治疗绿脓假单胞菌感染 患者。一种尝试是通过经典的杂交瘤技术或噬菌体展示抗体库克隆来 产生人单克隆抗体。

这两种方法及由此产生的抗体均表现出一些严重的缺陷。

经典的杂交瘤技术(“Kohler和Milstein”方法)基于通过用选择 的抗原主动免疫以及通过与骨髓瘤配体融合，从而产生具有所需特异 性的鼠B细胞。之后，需要通过基因工程对产生抗体的克隆的基因信 息进行人源化，并在合适的表达系统中产生抗体。同样，噬菌体展示 抗体库克隆需要复杂的抗体基因工程，并要建立合适的表达系统。

已知针对细菌LPS的鼠单克隆抗体能识别与人抗体不同的表位。 因此，在小鼠体内产生单克隆抗体之后进行人源化并非必然分离到其 特异性与人类应用相关的抗体。

因此，IgM同种型抗体由于与IgM关联的效应器机制对于抗细菌 免疫是最佳的，因而最为有效。但由于该分子复杂的五聚形式，迄今 尚未实现IgM抗体的重组表达。因此，通过噬菌体展示技术分离的抗 体的表达局限于IgM以外的同种型。

作为另外的选择方案，在产生绿脓假单胞菌LPS部分的人单克隆 抗体方面进行了不同的尝试。但是，或是产生所述抗体的方法没有优 势(由于类淋巴母细胞的不稳定性)，或是抗体表现出非人糖基化方式， 或是需要非常大量的抗体。而且，现有技术中描述的许多抗体缺乏效 应器功能，从而不具保护性。

发明内容

因此，本发明要解决的一个技术问题是提供一种对绿脓假单胞菌 特定血清型的LPS特异的人单克隆抗体，其中该抗体表现出很高的保 护能力，尤其是在体内。

人单克隆抗体解决的技术问题如下定义。

根据本发明，提供了对绿脓假单胞菌IATS O11血清型的LPS特异 的称为1BO11的人单克隆抗体，其中该抗体轻链的可变区包括CDR1 区中的SEQ ID NO：1、CDR2区中的SEQ ID NO：2和CDR3区中的SEQ ID NO：3中的至少一个，并且其中该抗体重链的可变区包括CDR1区中 的SEQ ID NO：4、CDR2区中的SEQ ID NO：5和CDR3区中的SEQ ID NO：5中的至少一个；或者其能够结合所述LPS的片段或衍生物。

本发明进一步提供能够产生单克隆抗体的杂交瘤和分别编码该抗 体轻链和重链的核酸。而且，本发明提供包括该核酸的载体和宿主细 胞。此外，提供了该单克隆抗体的生产方法。此外，提供了包括至少 一种抗体和/或至少一种核酸的药物组合物及其第二医药用途。