[发明专利]组合S1P受体激动剂/调节剂和免疫抑制药的抗淋巴细胞抗体诱导

说明书

本发明涉及特别在治疗移植患者的过程中将免疫抑制药、S1P受体调 节剂和抗淋巴细胞抗体组合的免疫抑制疗法。

目前的维持免疫抑制疗法、例如肾移植后的维持免疫抑制疗法将钙依 赖磷酸酶抑制剂(环胞菌素或他克莫司)与一种或多种免疫抑制药、包括皮 质类固醇、硫唑嘌呤(AZA)、霉酚酸吗乙酯、霉酚酸钠或大环内酯免疫抑 制剂(依维莫司、西罗莫司)组合。已经作出努力来发展这些组合以尽可能 地预防急性排斥发作和将不良作用降到最低或避免不良作用。这些努力已 经产生了显著的进展，但是特别在排斥率和副作用方面仍然需要进行改善。

现在已经出人意料地发现S1P受体激动剂与一种或多种免疫抑制药、 包括抗淋巴细胞抗体疗法的组合可提供另外的意想不到的益处。特别地， 当将其它药物的剂量保持在最低水平时，可降低排斥发作、例如肾脏或心 脏移植后的排斥发作，由此可改善耐受性。

因此，本发明提供了在接受者中抑制同种异体移植物排斥的方法，所 述方法包括给所述接受者同时或依次施用治疗有效量的S1P受体调节剂以 及一种或多种免疫抑制药和抗淋巴细胞抗体。

优选根据本发明的该方法可以用于治疗肾移植。

S1P受体调节剂或激动剂是靶向于一种或多种1-磷酸鞘氨醇受体、例如 S1P1至S1P5的化合物。术语调节意欲包括S1P受体的激动作用或功能拮抗 作用。与S1P受体结合的调节剂或激动剂例如可以使受体活化、内在化或 脱敏。这可能与通过G蛋白进行的S1P受体信号传导的调节、不同G蛋白的 结合或解离、G蛋白与S1P受体的相互作用的变化、通过RGS(G蛋白信号 传导的调节剂)蛋白进行的G蛋白调节的改变、被调节剂占据的受体的磷酸 化的增加和/或下游信号传导途径/激酶的活化有关。

可以在下列试验中测定S1P受体激动剂或调节剂与各种人S1P受体的 结合亲和力：

对人S1P受体S1P₁、S1P₂、S1P₃、S1P₄和S1P₅测试化合物的S1P受体激 动剂或调节剂活性。通过对化合物诱导的GTP[γ-³⁵S]与膜蛋白的结合进行 定量评价功能性受体活化，所述膜蛋白由稳定表达适当人S1P受体的转染 CHO或RH7777细胞制备。所用的测定技术为SPA(基于闪烁邻近的测定 法)。简言之，连续稀释DMSO溶解的化合物，在50mM Hepes、100mM NaCl、10mM MgCl₂、10μM GDP、0.1％不含脂肪的BSA和0.2nM GTP [γ-³⁵S](1200Ci/mmol)存在下加入到SPA-珠(Amersham-Pharmacia)固定的 表达膜蛋白的S1P受体中(10-20μg/孔)。于RT在96孔微量滴定板中孵育120 分钟后，通过离心步骤分离未结合的GTP[γ-³⁵S]。用TOPcount平板读数仪 (Packard)对膜结合GTP[γ-³⁵S]引起的SPA珠发光进行定量。使用标准曲线 拟合软件计算EC₅₀。在本测定法中，优选S1P受体调节剂或激动剂的与S1P 受体的结合亲和力＜50nM。

优选的S1P受体激动剂或调节剂例如为除其S1P结合特性外还具有加 速淋巴细胞归巢特性的化合物，例如引起由淋巴细胞由循环至次级淋巴组 织的再分布、优选可逆的再分布导致的淋巴细胞减少的化合物，不引起全 身免疫抑制。分离原初细胞；刺激来自血液的CD4和CD8 T-细胞和B-细 胞以迁移入淋巴结(LN)和派尔结(PP)。

可以在下述血液淋巴细胞消减(Blood Lymphocyte Depletion)试验中测定淋巴细 胞归巢特性：

通过对大鼠管饲口服施用S1P受体激动剂或调节剂或载体。在-1天获 得用于血液监测的尾血以得到基线个体值，并在施用后2、6、24、48和 72小时获得用于血液监测的尾血。在本试验中，当以例如＜20mg/kg的剂 量施用时，S1P受体激动剂或调节剂使外周血液淋巴细胞消减例如50％。

适宜的S1P受体调节剂或激动剂的实例例如有：

-如EP627406A1中公开的化合物，例如式I化合物，

其中