[发明专利]用于渗滤的方法

说明书

技术领域

本申请涉及细胞培养收获微量过滤领域。

相关申请的交互参考

本申请要求在2005年1月25日提交的临时美国申请号60/647,184的 优先权，其在本文以其全文引用作为参考。

背景

在生物技术应用中，根据操作模式，渗滤用于缓冲液交换和产物回收。 在渗滤中，将缓冲液引入循环池或存留池中，同时从系统中移走滤液。渗 滤法可用作洗涤存留物(即产物)，或者用于通过过滤系统洗涤产物用于 收集。微量过滤收获方法的目标是，使用渗滤最大程度地从过程液流中回 收产物。

概述

本发明涉及这样的发现，即将非离子表面活性剂，例如Pluronic^F68、 聚乙二醇、或其他非离子嵌段共聚物表面活性剂，添加到在渗滤步骤所使 用的缓冲液中，能够降低生产流体的浊度，所述渗滤步骤是微量过滤法(例 如，切向流过滤；TFF)的一部分。因此，本发明包含渗滤的方法。方法 包括提供渗滤的存留物，以及向存留物中添加非离子表面活性剂。非离子 表面活性剂可以是，例如Pluronic^F68或聚乙烯醇(PVA)。在一些实施 方案中，非离子表面活性剂在缓冲液中，例如磷酸缓冲盐溶液(PBS)。 缓冲液中非离子表面活性剂的浓度可以在0.2和4g/L、0.2和3g/L、0.5 和2.5g/L、0.5和2g/L、0.5和1.5g/L之间。在一些情况中，缓冲液中非 离子表面活性剂的浓度约为1g/L或2.5g/L。在某些实施方案中，存留物 包括细胞和培养基。在本发明的某些方面中，渗滤得到的滤液的浊度低于 没有非离子表面活性剂时进行的渗滤。在另一个实施方案中，存在非离子 表面活性剂时从存留物中产物的回收多于没有非离子表面活性剂时产物的 回收。在另一个实施方案中，存留物包含药品，例如重组蛋白质、重组肽、 或天然存在的蛋白质或肽。在某些情况下，存留物包含在存留物中与细胞 等渗的缓冲液，例如PBS。在另一个实施方案中，渗滤在温度约为20℃-25 ℃、2℃到37℃，或2℃-25℃发生。渗滤可以为，例如不连续渗滤或恒容 渗滤。在某些情况中，非离子表面活性剂的浓度在渗滤过程中没有显著改 变。非离子表面活性剂可以在细胞培养基中。

本发明还涉及使用本文中描述的方法如渗滤产生的产物。

另一方面，本发明涉及渗滤方法，其包括将非离子表面活性剂(例如， Pluronic^F68或PVA)的浓度维持约为1g/L。

另一方面，本发明涉及渗滤的组合物，组合物包含大约1g/L(例如 Pluronic^F68)或2.5g/L(例如PVA)的非离子表面活性剂。组合物还 可以包含等渗缓冲液，例如PBS。

除非另外定义，本文中使用的所有技术术语和科学术语都采用本发明 所属领域普通技术人员普遍理解的相同意义。尽管与本文中描述的类似或 等同的方法和材料可以用于本发明实践或测试，适当的方法和材料描述如 下。本文中提到的所有刊物、专利申请、专利，以及其他文献都以其全文 引用作为参考。此外，材料、方法，和实施例都意在说明而非限制。

从详细的描述、图表以及权利要求中，将清晰的了解本发明的其他特 点和优点。

详细描述

在蛋白质加工过程中，TFF可以作为回收方法的一部分，用于将进样 液流中的完整细胞和细胞碎片与其他成分分离。例如，利用培养的细胞的 生产方法可以使用整合了浓缩和渗滤的收获微量过滤步骤。本方法使用例 如TFF，将含有诸如重组蛋白质的产物的细胞培养液从生产细胞系中分离。 经过最初的收获微量过滤(浓缩)后，将一般含有比最初过滤之前更高密 度的细胞的存留物通过过滤系统再循环，并且渗滤以回收在收获微量过滤 系统(渗滤)中被阻挡的额外的产物。对于此渗滤步骤，一般向存留物中 添加等渗缓冲液(例如PBS)。此渗滤可以使用添加缓冲液的不连续或恒 容方法来进行。

通常，术语“过程液流(process stream)”包括进样液流、渗透液流， 和存留液流等，即在过程中含有细胞培养物产物的流动液体。滤液指任何 通过滤器的物质，即渗透液流。“存留物(retentate)”指不通过滤器而 遇到了过滤装置，并重新回流到储池中的物质。“进样液流”指离开储池， 通过泵并注入滤器的物质。