[发明专利]干式分析元件

说明书

技术领域

本发明涉及能够迅速/简便地测定痕量样品溶液中的生化物质的 干式分析元件。

背景技术

作为用于测定活体内的生化物质、酶和其它物质的干式分析元件 (包括多层分析元件、干式分析元件以及多层分析装置所有这些)， 例如，在专利文献1和专利文献2中描述了这些技术。这些技术涉及 用于对生物样品(例如血液、淋巴液、脑脊髓液或尿)中所含有的成 分进行定量分析的干式分析元件。

然而，在活体内或活体外的极大量的生物合成反应(不仅涉及生 物样品中的常规生化物质、酶等)中，都涉及焦磷酸的释放和焦磷酸 的分解。鉴于此，当从热力学角度研究生物合成反应时，对焦磷酸进 行测定是有效的。例如，由DNA聚合酶催化脱氧核苷三磷酸聚合来 合成核酸。在该步骤中，焦磷酸作为核酸合成的副产物被释放。在核 酸合成过程中，从能量角度而言，焦磷酸的释放是很重要的。此外， 通过检测焦磷酸来确认核酸合成是否进行也是重要的。例如，对于核 酸扩增反应后的反应溶液，还通常实施以下的处理。通过测定焦磷酸 来确认扩增反应是否实际上发生。

用于测定活体内或活体外的此类液体样品中的焦磷酸的干式分 析元件技术在(例如)专利文献3中有所描述。该技术如下所述。在 干式分析元件中，焦磷酸(PPi)在无机焦磷酸酶(PPase)的作用下 被转化为无机磷酸(Pi)。无机磷酸(Pi)通过嘌呤核苷磷酸化酶(PNP) 与黄嘌呤核苷或次黄嘌呤核苷反应。所产生的黄嘌呤或次黄嘌呤被黄 嘌呤氧化酶(XOD)氧化，从而形成尿酸。利用在该氧化过程中产生 的过氧化氢(H₂O₂)、通过过氧化物酶(POD)的作用使成色剂(染 料前体，例如隐色染料)显色，并通过比色法测定该色度。

另外，作为用于测定焦磷酸的反应体系，以下的过程也是已知的。 在生成黄嘌呤或次黄嘌呤的反应过程中和反应之后，例如，可以使用 心肌黄酶(DI)和在黄嘌呤脱氢酶(XDH)作用下生成的NADH使 成色剂(例如，甲型染料，如硝基四唑蓝)显色，并通过比色法测 定该色度。

本文中可用的干式分析元件以这样的方式构建：将一层或多层功 能性层设置在透明的支持体上。使检测试剂被包含在至少一层(或多 层)中。由此，在滴加既定量的液体样品之后，通过分析元件外部的 反射光或透射光对层中反应所得的染料进行比色法测定。

在滴加既定量的液体样品之后，将干式分析元件保持在既定的温 度下(温育)，以便使显色反应充分进行。然后，(例如)照明光从 透明支持体一侧进行辐照。由此，测量特定波长区域的反射光的量或 透射光的量，从而确定反射光密度或透射光密度。然后，根据先前测 定的标准曲线进行定量分析。

在(例如)专利文献3所述的焦磷酸测定用的干式分析元件或专 利文献4所述的干式分析元件中，在相关技术领域中，所述干式分析 元件除了具有包含显色反应所需的试剂(如酶、显色物质或基质)的 层和透明支持体以外，还设置有铺展层，从而达到容纳所滴加的液体 样品、并使该液体样品迅速铺展的目的。在这种情况下，作为铺展层， 可以使用膜过滤器(刷状聚合物)、三维网格颗粒状结构物、织物等， 其中，所述的三维网格颗粒状结构物含有通过在水的作用下不会发生 溶胀的聚合物粘合剂以点接触方式彼此接触而形成的聚合物珠子。

专利文献1：JP-A-60-82859

专利文献2：JP-A-60-222770

专利文献3：JP-A-2004-156983

专利文献4：JP-A-2003-270249

发明内容

本发明待解决的问题

然而，当按照专利文献3和4的方式设置含有所述物质的铺展层、 并对其进行透射光光度测定时，入射到干式分析元件内部的光会受到 衰减/散射等的影响。这会妨碍进行精确的测定。另一方面，取出铺 展层对透射光光度测定是有利的。然而，此时被滴加到功能性层中的 液体样品的液体渗透速率降低，这不适于进行快速的定量分析。

本发明的目的是提供这样的干式分析元件：能够迅速、简便地分 析(例如)液体样品中的生物材料，并且不需要设置铺展层。 解决所述问题的方法