[实用新型]微量碳酸酐酶活性测定装置

说明书

技术领域：

本发明涉及碳酸酐酶测定装置。

背景技术

碳酸酐酶(简写CA)是一组含锌金属酶，迄今为止至少发现8种同工酶，各同工酶的催化活性、生理功能及其对抑制剂的敏感性有明显差异。作为快速反应酶，碳酸酐酶催化CO₂进行可逆的水合反应：水合反应产生的H⁺和HCO₃^-通过H⁺/Na⁺和Cl^-/HCO₃^-交换，保证了生物对Na⁺和Cl^-的吸收，维持生物体内CO₂和HCO₃^-平衡。碳酸酐酶参与生物体内酸碱平衡调节、二氧化碳排泄、钙离子吸收、肌肉收缩等生理活动，是研究生物体内渗透调节和离子调节的核心酶之一。

碳酸酐酶的测定方法有测压法、比色法、CO₂传感器法、ΔpH电极法，早期较多采用比色法，但色素本身对碳酸酐酶活性有抑制作用，因此，用比色法检测出来的数据不能反映碳酸酐酶活性的真实值；ΔpH电极法应用到动物的碳酸酐酶活性检测，其操作步骤是：

1、在0-4℃条件下，取一定量组织匀浆液用Tris缓冲液稀释组成反应缓冲体系，充分混合均匀；

2、添加饱和CO₂水至反应缓冲体系中，即刻计时，监测反应缓冲体系pH值；

3、记录下降0.15pH所用的时间(t_enz)；

4、在0-4℃条件下，取未加组织匀浆液的Tris缓冲液；

5、重复步骤2；

6、记录下降0.15pH所用的时间(t₀)；

7、通过酶活力单位计算公式：U＝t₀/t_enz-1，可以计算得出CA的活性；酶活性标准单位用μmolCO₂.min^-1.mg^-1表示。

碳酸酐酶活性测定方法所用的试验用具包括反应容器、添加饱和CO₂水的移液枪、电极、水箱、循环水管、磁力搅拌机。ΔpH电极法虽然容易操作，但还存在一些问题：

1、磁力搅拌将各种反应溶液混合均匀的同时，磁场对碳酸酐酶活性有增强作用，因此会影响碳酸酐酶活性测定的准确性。

2、为避免对后续样品测定产生影响，测完一个样品必须先切断循环水，然后更换装置或对其进行清洗和干燥，由于酶容易残留于容器壁上不易清洗，操作比较复杂，影响了测定进度。

3、由于反应容器中需要放置监测pH变化的电极，以及用于混合溶液的搅拌子，要求反应容器体积较大，被测组织的样品需要量较多。对于一些样品量少的组织，如对虾的触角腺(成虾触角腺的直径仅1-2mm)，则需要增加采样个体数。

发明内容

本发明针对ΔpH电极法存在的问题，需要避免磁场对碳酸酐酶活性测定的影响，并解决反应容器不易清洗和体积较大的问题。

本实用新型包括采用反应容器、移液枪、电极、恒温水箱、振荡器，其特征是反应容器采用10ml玻璃烧杯，玻璃烧杯置于一个凹形水浴杯的凹穴中，凹形水浴杯有进水管和溢水管，凹形水浴杯的进水管和溢水管通过连接管连接恒温水箱，凹形水浴杯外壁有泡沫包被、凹形水浴杯连同泡沫包被在振荡器平板上固定。

本实用新型由于将凹形水浴杯连同泡沫包被固定在振荡器平板上，以振荡搅拌取代磁力搅拌，使溶液混合均匀，避免了磁场对碳酸酐酶活性的增强作用；采用烧杯作为溶液均匀混合的反应容器，测定完一个样品后，只需更换干净干燥的烧杯即可进行后续样品的测定，操作简便；反应容器的体积减小到10ml，组织匀浆液与Tris缓冲液形成的缓冲体系仅需8ml即可保证电极的正常测定，对虾触角腺碳酸酐酶活性的测定，采用本装置仅需要1尾成虾，样品数量相应减少。

附图说明

附图表示的是本装置的结构示意图。

具体实施方式

下面结合附图说明实施本实用新型的最好方式：