[发明专利]一种大豆脂肪酸的微量检测方法

说明书

技术领域

本发明属于农业生产技术领域。是一种大豆脂肪酸含量微量检测方法。

技术背景

大豆油脂中含有人体必需的脂肪酸，具有重要的营养和保健价值。大豆油脂品质的优劣，取决于主要脂肪酸的组成及其配比。大豆中不饱和脂肪酸的亚油酸和亚麻酸是生物膜的重要组分，其含量的高低是油脂品质好坏的重要尺度，而亚麻酸易于氧化致使豆油变劣，降低大豆油的使用性和减少保存期限。因此，从营养和贮藏角度考虑，提高不饱和脂肪酸中油酸和亚油酸含量，适当降低棕榈酸和亚麻酸含量，使脂肪酸组分配比合理是非常重要的。

在大豆脂肪酸的研究中，如何实现主要脂肪酸组分的提取和检测是至关重要的。目前，许多学者在脂肪酸提取和检测方法上进行了大量的探讨和研究，并取得了一定阶段性的成果。然而，多数研究仅仅进行了脂肪酸的相对含量的测定，不能实现其绝对含量的检测。有些研究虽然能够进行脂肪酸的定量检测，但大都采用外标法，使得测定值与真实值之间还有一定的偏差，而且需要样品的量很多，不能有效进行各组分含量的微量检测。

为此，我们针对上述缺陷，对大豆脂肪酸提取方法、色谱检测条件进行改进，同时结合大豆籽粒的微量取样方法，研究出本发明。

发明内容

本发明从以上技术背景出发，采用甘油三酯对大豆籽粒中的脂肪酸总量进行萃取，然后加入氢氧化钾的甲醇溶液在水浴中进行甲酯化，把得到的甲酯化的脂肪酸混合物离心后，取上清液在气相色谱上进行微量检测。具体提取和检测程序如下：

a.前期准备

药品准备：甲醇；390mg/500ml的己烷甘油三酯溶液；2mol/l的氢氧化钾甲醇溶液；

样品准备：单个籽粒编号后，用壁纸刀片在豆粒的远脐端多次切取薄薄的碎片(注意不要超过籽粒的1/3)，用天平称取10-12毫克，放入编好号的带盖塑料试管中；

b.脂肪酸的提取和甲酯化

每个样品中加入2ml己烷甘油三酯溶液→立即加入2mol/l的氢氧化钾甲醇溶液200μl，并盖上盖→匀质器混匀10秒→轻轻震荡100次→5℃水浴15分钟→加入35μl甲醇和2ml超纯水终止反应→25℃用离心机以2000-2500转/分钟离心6分钟→吸取500μl上清液于2ml顶空瓶中，准备分析；

c.脂肪酸的气相色谱检测条件

氢火焰离子化检测器(FID)，量程3，衰减2，担体GAS：CHROMSORB-Q，80～100目，固定液DEGS，担体与固定液配比100∶4；色谱柱为不锈钢柱1000mm×3.2mm(内径)，柱温180℃，气化室240℃，检测室240℃；气体：载气N260ml/min，燃气H250ml/min，助燃气体空气500ml/min，纸速2.5cm/min，每样品重复3次，进样量0.5μl；

本发明采用内标法对各脂肪酸组分进行定量检测。大豆籽粒中各脂肪酸组分含量由对应的峰面积与内标物的峰面积的比值求得。

本发明的优点是采用内标法可以实现脂肪酸的精确定量检测；采用半粒法取样实现微量分析，同时不影响大豆籽粒的继续生长发育，在大豆育种上具有更重要的现实意义。

具体实施方式

本发明在中国科学院东北地理与农业生态研究所的“大豆功能营养资源拓宽与改良”课题中得到了应用。在课题实施过程中采用本发明对200多份东北大豆资源进行了分析和评价，得到了亚油酸含量高和亚麻酸含量低的大豆材料各两份，对于本课题的完成和优质油份大豆育种都起到了有效的技术支撑。下面列出了部分大豆资源籽粒中脂肪酸含量的检测结果：

部分大豆资源籽粒中脂肪酸含量的检测结果(μg/100g)

根据检测结果可以看出，东北大豆资源在脂肪酸组分含量存在很大的遗传变异。在各组分的相对含量，亚油酸＞油酸＞棕榈酸＞亚麻酸＞硬脂酸。这些检测结果与文献报道的基本上是一致的，可见本方法不仅可行，而且还在大豆优质油份育种和改良上具有重要的现实意义。