[发明专利]核酸精制方法及核酸精制器具

说明书

技术领域

本发明涉及，通过安全简便的操作，从含有长链核酸和短链核酸的试样中，高效地分离长链核酸和短链核酸，进行精制的技术。本发明可以作为基因组DNA和总RNA(信使RNA、核糖体RNA、转运RNA等)，或者，基因组DNA和质粒DNA的分离精制技术而利用。

背景技术

核酸作为与生物基因信息有关的物质，存在着基因组DNA、质粒DNA、信使RNA、核糖体RNA、转运RNA等功能不同的各种形态。

这些核酸分析可以给出在分子生物学上极其有用的信息。在分析各种核酸时，一般是优选进行前处理，也就是从含有多种核酸的生物试样中，分离和精制目的核酸。例如，以基因表达分析为目的对信使RNA进行分析时，将总RNA从对于信使RNA的分析可能成为阻碍物质的基因组DNA中分离，精制出来。

作为从生物材料中把总RNA从基因组DNA中分离、精制出来的方法，一般已知有酚·氯仿抽提法(非专利文献1)。本方法为，(1)用硫氰酸胍溶液将生物材料溶解，依次添加并混合酸性缓冲溶液、酚溶液、氯仿溶液，(2)通过离心分离，分离成含有RNA的水相、及含有变性蛋白质和不溶DNA的有机溶剂相与水相的中间层，(3)向含有RNA的水相中添加乙醇或异丙醇，(4)通过离心分离，选择性地沉淀不溶RNA。该方法与以前的超离心分离方法相比，可以对RNA进行高效地分离、精制，但是存在着必须使用有害的酚、氯仿的问题。

作为不使用酚、氯仿等，并且不需要乙醇沉淀、异丙醇沉淀等操作的核酸的精制方法，已知利用在离液剂存在下的核酸与含二氧化硅固相的结合特性的方法(非专利文献2和3)。关于后者的方法，还报道了使用其进行RNA和DNA的分离、精制的方法(专利文献1～5)，但是RNA和DNA的分离不充分，精制的RNA中混有较大量的DNA。

专利文献1：特开2004-340839号公报

专利文献2：特开2002-187897号公报

专利文献3：特表2000-505295号公报

专利文献4：特表2002-534080号公报

专利文献5：特开2004-201607号公报

非专利文献1：Analytical Biochemistry，162，156-159(1989)

非专利文献2：B.Vogelstein and D.Gillespie，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，76(2)，615-619(1979)

非专利文献3：R.Boom et al，J.Clin.Microbiol.28(3)，495-503(1990)

发明内容

发明要解决的问题

本发明的目的是，通过安全简便的操作，从含有长链核酸和短链核酸的试样中，高效地分离长链核酸和短链核酸，进行精制。

解决问题的方法

本发明人等为了解决上述问题进行潜心研究的结果发现，通过将含有长链核酸和短链核酸的试样与离液剂的混合液，在具有与长链核酸的接触效率高且与短链核酸的接触效率低的孔径的通液孔的含二氧化硅固相上，至少通液2次以上，能够仅使长链核酸高效地结合，与短链核酸的分离，实现精制。

即，本发明涉及核酸精制方法，其特征为，在含有长链核酸和短链核酸的试样中混合离液剂，使所述混合液在具有规定孔径通液孔的第1含二氧化硅固相上通液2次以上，接着，在具有孔径小于所述第1含二氧化硅固相的通液孔的第2含二氧化硅固相上，使所述混合液通液2次以上，然后，对结合在所述第1和第2含二氧化硅固相上的核酸各自进行回收。

在上述方法中，第1和第2含二氧化硅固相上的通液，均优选对于含二氧化硅固相从两个方向(例如，上下两个方向)反复进行2次以上。

本发明的方法中，结合在第1含二氧化硅固相上的核酸为，由20000个以上，优选50000个以上的脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸构成的长链核酸，结合在第2含二氧化硅固相上的核酸为，由10000个以下，优选5000个以下的脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸构成的短链核酸。

这时，第1含二氧化硅固相的通液孔的孔径为优选20～25μm，并且，第2含二氧化硅固相的通液孔的孔径为优选0.1～10μm。