[发明专利]烟草S期激酶蛋白1基因序列及其编码蛋白质序列和应用

说明书

技术领域

本发明涉及S期激酶相关蛋白1基因，具体地说是一种来源于抗病烟草品种枯斑三生烟(Nicotiana tabacum var.Samsun NN)的烟草S期激酶蛋白1基因序列及其编码蛋白质序列和应用。

背景技术

S期激酶相关蛋白1(S-PHASE KINASE-ASSOCIATED PROTEIN1，SKP1)是真核生物(烟草)中普遍存在的一类蛋白，是泛素连接酶3SCF复合体的核心亚单位。近几年来研究发现，SCF介导的泛素系统在茉莉酸信号途径和R-基因介导的抗性等生物反应过程中均有作用，但具体通路尚不太清楚，尤其是在壳寡糖的诱抗中的作用尚无报道。

发明内容

本发明目的在于提供一种烟草S期激酶蛋白1基因序列及其编码蛋白质序列和应用。

一种烟草S期激酶蛋白1基因序列，具有序列表中SEQ ID NO.1碱基序列。

所述的烟草S期激酶蛋白1cDNA基因序列的编码蛋白，具有序列表中SEQ ID NO.2编码的氨基酸序列。

应用基因序列的壳寡糖诱导植物抗性反应，从而可将所述基因序列用于制备生物农药。

本发明所具有的优点：

1.真核生物烟草中普遍存在的一类蛋白，是泛素连接酶3SCF复合体的核心亚单位，与烟草的抗病毒活性相关，分子量为17527.78Da，等电点4.57，定位于细胞质，其Skp1结构域位于4-105位氨基酸。

2.对生物农药的应用具有明显指导作用；该基因的克隆对于揭示壳寡糖诱导植物抗性反应的分子信号通路很有价值，并在寡糖生物农药的应用方面具有重要的理论指导意义。

附图说明

图1为本发明S期激酶相关蛋白1(SKP1)根据衍射数据得到三纬结构模型图。

具体实施方式

S期激酶相关蛋白1(S-PHASE KINASE-ASSOCIATED PROTEIN1，SKP1)是真核生物(烟草)中普遍存在的一类蛋白，是泛素连接酶3SCF复合体的核心亚单位。近几年来研究发现，SCF介导的泛素系统在茉莉酸信号途径和R-基因介导的抗性等生物反应过程中均有作用，功能上具有多样性，调节过程广泛；烟草SKP1是在壳寡糖处理条件下特异表达的，因此与壳寡糖诱导的植物抗性信号传导有着密切的关系。

实施例1

1.烟草(枯斑三生烟)的S期激酶相关蛋白1基因的cDNA的克隆及序列

1)50mg/L的壳寡糖喷施烟草叶片，喷水作对照，分别在8h和168h取样提取总RNA进行DDRT-PCR，将差异片段回收并亚克隆后，测序获得3′端序列，该片段与本塞姆氏烟草的SKP1(S-PHASEKINASE-ASSOCIATED PROTEIN1)基因同源性为82％。

2)利用CLONTECH公司的试剂盒获得枯斑三生烟草的SKP1基因的5′端及cDNA的全长，进而推导出氨基酸序列。

3)可被壳寡糖诱导的枯斑三生烟草SKP1具有以下cDNA碱基(参见序列表1)和蛋白质的氨基酸序列(参见序列表2)。

烟草S期激酶相关蛋白1基因(SKP1)的cDNA序列特征：基因组序列：653bp，核苷酸、线性双链，最初来源枯斑三生烟草(Nicotiana tabacumvar.samsun NN)；

烟草S期激酶相关蛋白1基因(SKP1)的氨基酸序列特征：线性、单链、155氨基酸。

4)根据枯斑三生烟SKP1基因的cDNA全长序列和pET-23b(+)的特点，设计SKP1基因原核表达的PCR引物序列，分别在引物skp1es和skp1ea的5′端引入了Nde I和Xhol I酶切位点(下划线部分)，另在下游引物的酶切位点后面去掉目的基因的终止密码子以产生融合有His标签的融合蛋白，引物序列入下：SKP1上游表达引物(skp1es)5′CGGCCCATATGTCCTCCTCAAAGATGATC 3′；SKP 1下游表达引物(skp1ea)5′GCCGCCTCGAGCTCAAATGCCCAAGCATT 3′，以枯斑三生烟草总RNA为模板扩增待表达的基因片段，克隆到表达载体pET-23b(+)上，转化表达菌株BL21(DE3)诱导表达，表达出与预期蛋白相符的目的蛋白，且该蛋白的大量表达可以抑制大肠杆菌的增殖，因此该蛋白具有一定的抑菌活性，可增强植物的抗病性。