[发明专利]纤维素分解酶基因及其用途

权利要求书

1.一种制造牛皮纸浆的方法，包括下列步骤：

制备编码反义RNA的DNA，所述反义RNA与来源于担子菌的纤维素分解酶基因转录产物的全部或一部分基本互补；

制备含有(a)所述DNA、或(b)含有所述DNA的重组DNA和具有启动子活性的DNA片段的载体，其中所述DNA与所述DNA片段结合，这样纤维素分解酶基因的反义RNA就可作为转录的结果而产生；

用所述载体转化宿主细胞，从而制备具有被抑制的纤维素分解酶活性的宿主细胞；

将所述具有被抑制的纤维素分解酶活性的宿主细胞接种到木屑中以对其进行处理；并且

蒸煮经过处理的木屑。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述纤维素分解酶基因包括选自编码纤维二糖脱氢酶、纤维二糖水解酶I、纤维二糖水解酶II、属于糖酵解酶家族61的内切葡聚糖酶、属于糖酵解酶家族12的内切葡聚糖酶、属于糖酵解酶家族5的内切葡聚糖酶、和属于糖酵解酶家族9的内切葡聚糖酶的各基因的一个或多个基因。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述纤维二糖脱氢酶基因是含有下列核苷酸序列(a)-(c)中任何一个的分离的纤维二糖脱氢酶基因：

(a)SEQ ID No.1或3所示的核苷酸序列；

(b)与所含核苷酸序列与(a)中核苷酸序列互补的核苷酸序列在严格条件下杂交、并编码具有纤维二糖脱氢酶酶活性的蛋白的核苷酸序列；和

(c)包含SEQ ID No.1或3的一个或多个核苷酸的缺失、取代或添加，并编码具有纤维二糖脱氢酶酶活性的蛋白的核苷酸序列。

4.根据权利要求2所述的方法，其中所述纤维二糖水解酶I的基因是含有下列核苷酸序列(a)-(c)中任何一个的分离的纤维二糖水解酶I的基因：

(a)SEQ ID No.7、9、或11所示的核苷酸序列；

(b)与所含核苷酸序列与(a)中核苷酸序列互补的核苷酸序列在严格条件下杂交、并编码具有纤维二糖水解酶I基因的酶活性的蛋白的核苷酸序列；和

(c)包含SEQ ID No.7、9或11的一个或多个核苷酸的缺失、取代或添加，并编码具有纤维二糖水解酶I基因的酶活性的蛋白的核苷酸序列。

5.根据权利要求2所述的方法，其中所述纤维二糖水解酶II的基因是含有下列核苷酸序列(a)-(c)中任何一个的分离的纤维二糖水解酶II的基因：

(a)SEQ ID No.14所示的核苷酸序列；

(b)与所含核苷酸序列与(a)中核苷酸序列互补的核苷酸序列在严格条件下杂交、并编码具有纤维二糖水解酶II基因的酶活性的蛋白的核苷酸序列；和

(c)包含SEQ ID No.14的一个或多个核苷酸的缺失、取代或添加，并编码具有纤维二糖水解酶II基因的酶活性的蛋白的核苷酸序列。

6.根据权利要求2所述的方法，其中所述属于糖酵解酶家族61的内切葡聚糖酶的基因是含有下列核苷酸序列(a)-(c)中任何一个的分离的属于糖酵解酶家族61的内切葡聚糖酶的基因：

(a)SEQ ID No.18所示的核苷酸序列；

(b)与所含核苷酸序列与(a)中核苷酸序列互补的核苷酸序列在严格条件下杂交、并编码具有属于糖酵解酶家族61的内切葡聚糖酶活性的蛋白的核苷酸序列；和

(c)包含SEQ ID No.18的一个或多个核苷酸的缺失、取代或添加，并编码具有属于糖酵解酶家族61的内切葡聚糖酶活性的蛋白的核苷酸序列。

7.根据权利要求2所述的方法，其中所述属于糖酵解酶家族12的内切葡聚糖酶的基因是含有下列核苷酸序列(a)-(c)中任何一个的分离的属于糖酵解酶家族12的内切葡聚糖酶的基因：

(a)SEQ ID No.20所示的核苷酸序列；

(b)与所含核苷酸序列与(a)中核苷酸序列互补的核苷酸序列在严格条件下杂交、并编码具有属于糖酵解酶家族12的内切葡聚糖酶活性的蛋白的核苷酸序列；和

(c)包含SEQ ID No.20的一个或多个核苷酸的缺失、取代或添加，并编码具有属于糖酵解酶家族12的内切葡聚糖酶活性的蛋白的核苷酸序列。