[发明专利]一种丹参酮ⅡA化学对照品的分离制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从丹参提取物中分离获得纯度大于98％的丹参酮IIA化学对照品的制备方法。

背景技术

丹参是我国传统药学中常用药物之一，其制剂在临床上应用非常广泛，丹参具有活血调经，祛瘀止痛，养心安神的功效，丹参酮IIA是丹参中主要药效成分之一，是中国药典中规定的含量测定成分。研究表明丹参酮IIA对多种心脑血管疾病及皮肤病征有良好治疗效果，广泛应用于医药和化妆品领域。

目前丹参酮IIA的分离方法主要为正相色谱法、大孔吸附树脂法、超临界二氧化碳萃取法和高速逆流色谱法。

正相色谱法使用硅胶作为填料，以甲醇-氯仿作为洗脱液，可以获得98纯度的丹参酮IIA，在分离过程中容易产生不可逆吸附，具有样品易损失，易污染，洗脱液毒性大的缺点。大孔吸附树脂法使用不同比例乙醇洗脱，具有上样量大，毒性小的特点，但只能获得的是丹参酮IIA含量低的混合物。超临界二氧化碳萃取具有绿色环保的特点，同时可以避免高温分解和氧化，有利于保持丹参酮IIA的化学稳定性。但由于缺少在线监测手段，丹参酮IIA的纯度难以稳定达到98％以上。高速逆流色谱法不需使用固定填料，所以没有不可逆吸附，具有样品无损失，无污染的特点，目前高速逆流色谱多局限于实验室规模，难以大量获得98％纯度以上丹参酮IIA化学对照品。

发明内容

为克服现有技术的缺陷，优化分离条件，本发明的目的在于提供一种分离时间短、分离效果好、产品纯度高(纯度在98％以上)的丹参酮IIA化学对照品的分离制备方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案：分离制备方法，以重量含量50～97％的丹参酮IIA提取物为原料，以制备型高效液相色谱为分离手段，以甲醇-水溶液为洗脱体系，具体步骤为：

(1)样品预处理：将重量含量50～97％的丹参酮IIA提取物用甲醇、乙醇或氯仿溶液溶解，配置成重量浓度为8～60mg/ml的丹参酮IIA提取物溶液，经0.22～0.45μm微孔滤膜过滤；

(2)色谱柱处理：高效液相色谱柱选择制备型高效液相色谱柱，以5-20倍柱体积的洗脱体系溶液平衡色谱柱；洗脱体系溶液为甲醇水溶液，其体积浓度为60～85％；

(3)进样：将过滤后的样品溶液通过六通阀或泵进样，进样体积为1～100ml；

(4)洗脱：采用洗脱体系溶液洗脱色谱柱，流速控制在10～600ml/min，在线紫外监测，收集含有丹参酮IIA的洗脱液；

(5)丹参酮II A化学对照品的获取：减压浓缩所收集到的丹参酮IIA洗脱液，至干，即获得纯度大于98％的丹参酮IIA。

丹参酮IIA的结构式如下：

所述制备型高效液相柱可以选用商品化或自己装填的制备型高效液相柱；其填料可为C8或C18键合相填料；自己装填的制备型高效液相柱装填方式为湿法装柱，制备型高效液相柱的填料粒径可为5-20μm，柱效在2000以上；在线紫外监测，其监测波长为220nm～290nm；丹参酮II A洗脱液收集后，减压浓缩，浓缩温度控制在55～70℃。

以本方法从丹参提取物中分离丹参酮IIA化学对照品具有如下优点和进步：

1.本发明以制备型高效液相为分离手段，采用5～20μm C18作为固定相，同时优化色谱条件，使丹参酮II A得到高效分离，可以稳定获得纯度在98％以上的丹参酮IIA化学对照品，同时缩短分离时间，单次进样制备时间少于40分钟。

2.本发明所述的甲醇-水洗脱体系能有效的保证丹参酮IIA与其他成分得到有效分离，从而保证分离的效果。

3.本发明采用紫外监测器在线监测，使丹参酮IIA的分离情况可以直接监测，并可以选择性收集，显著提高收集效果。

4.本发明所述方法操作简便，条件温和，能有效的保证丹参酮IIA的稳定性。

5.可产业推广。色谱柱规格为50×250mm时，其规模可达到10克/月以上。

附图说明

图1为本发明实施例1制备的丹参酮IIA化学对照品的纯度分析色谱图。

具体实施方式

下面通过实施例和附图对本发明做进一步详细说明。

实施例1：

本实施例中，以50％的丹参酮IIA提取物为原料，以5μmC18键合相填料为吸附剂，以含有甲醇-水(75∶25，体积比)溶液为洗脱溶剂，具体工艺步骤如下：

1.样品预处理

丹参酮IIA提取物用氯仿溶解，配置成浓度为60mg/ml的丹参酮IIA溶液，经0.22μm微孔滤膜过滤。

2.色谱柱处理