[发明专利]化妆品中磺胺类药物的高效液相色谱检测方法

说明书

技术领域

本发明是一项利用高效液相色谱仪检测化妆品中磺胺类药物的新技术，尤其适用于化妆品中微量磺胺类药物多组分分离后的定性及定量分析。

背景技术

磺胺类药物(Sulfonamides，SAs)是指具有对氨基苯磺酰胺结构的一类药物的总称，作为一种广谱高效的抗菌药物被广泛应用到药品、饲料、和化妆品中。国家卫生部颁布的2002年版《化妆品卫生规范》规定，化妆品中不得添加磺胺类药物。磺胺类药物由于其广谱高效的杀菌作用，被添加到祛痘类产品以达到消炎、祛痘、除螨及抗粉刺的目的。但这类药物的不良反应较多，可能导致过敏反应，使患者出现药物热和皮疹，可致肝、肾损害，并可能导致畸胎，另外，磺胺类药物还会导致许多病原微生物产生抗药性。因此，为保护化妆品消费者的健康安全，建立灵敏、准确、快速的化妆品中磺胺类药物的检测方法是十分紧迫和必要的。

目前磺胺类药物的检测方法主要有紫外分光光度法、薄层色谱法、永停滴定法、气相色谱法等。紫外分光光度法是比较经典的方法，但灵敏度不高，由于磺胺类药物具有极其相近的吸收峰容易造成相互干扰，不利于多组分磺胺类药物的同时分析。薄层色谱法灵敏度高、选择性好，但重复性差，且检测步骤繁琐。永停滴定法所用试剂毒性大，技术难于掌握，且测定的是磺胺类药物的总量，并不能区分是哪种磺胺类药物，也不适用于化妆品中多组分磺胺类药物的分析。

由于化妆品种类繁多，基质复杂，各成分的理化性质差别较大，尤其是磺胺类药物作为禁用成分添加到化妆品中，其含量较低，以上所述各种方法无法检测出化妆品中微量的磺胺类药物成分。因此，目前还没有一种行之有效的方法能检测化妆品中的微量禁用成分——磺胺类药物。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测化妆品中磺胺类药物的分析方法，该项技术利用高效液相色谱仪不仅可以对化妆品中的磺胺类药物进行准确的定性分析，而且还可以进行微量的定量分析。

本发明是用一定浓度的甲醇提取化妆品中的磺胺类药物，然后将提取液过滤，滤除固体杂质，直至滤液澄清，取制备好的样液上机，用磷酸二氢钾-甲醇溶液进行洗脱分离。所用高效液相色谱仪的主要配置包括十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的反相色谱柱、紫外检测器和二极管阵列检测器。

本发明方法的主要分析步骤如下：

(1)称取一定量的化妆品(乳、膏、霜或水剂)于10ml刻度离心管中，加入60％甲醇-水(盐酸调节水的pH＝2.0)。涡旋混匀，超声提取20min，0.45μm滤膜过滤(如果超声后溶液很浑浊，则先用布氏漏斗抽滤后取续滤液，再用滤膜过滤)。取续滤液进样。

(2)高效液相色谱仪采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的反相色谱柱，紫外检测器与二极管阵列检测器串联使用。

(3)采用磷酸二氢钾0.05mol/L溶液(用三乙胺调节pH值为4.0-6.0)-甲醇(70∶30)流动相平衡色谱柱约20min，使基线平稳，该条件下保留时间适合，峰形对称，分离度好(R＞1.5)。

(4)选用262nm波长作为检测波长。(磺胺类药物都含有对氨基苯磺酰胺结构，在波长250～285nm内有强紫外吸收。用二极管阵列检测器测定磺胺、磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲噁唑四种标准物质混合标液的吸收光谱，测得磺胺在259nm处有最大吸收，磺胺嘧啶在263nm处有最大吸收，磺胺二甲嘧啶在260nm处有最大吸收，磺胺甲噁唑在265nm处有最大吸收。最终选定262nm作为检测波长，在此波长下，4种磺胺类药物均有较高的检测灵敏度。)

(5)取磺胺、磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲噁唑四种标准物质混合标液上机，得到四种标准物质的色谱图和光谱图。

(6)分别取四种标准物质配制成一定梯度浓度的标准液，做四种标准物质的峰面积-浓度标准曲线。

(7)取制备好的样液上机，用磷酸二氢钾0.05mol/L溶液(用三乙胺调节pH值为4.0-6.0)-甲醇(70∶30)流动相以1.0ml/min的流速进行洗脱，同时在262nm的检测波长下采集数据。

(8)将样品的色谱图和标准品的色谱图进行比较，样品中与标准品保留时间相近(误差范围：标准品保留时间±0.5分钟)的组分即为相应的磺胺类成分。

(9)将样品色谱图中磺胺类组分的光谱图和标准品的光谱图进行比较，若两者的最大吸收波长及光谱图特征相似，可进一步确定样品中的磺胺类药物成分。

(10)将磺胺组分的色谱峰面积带入(6)中的标准曲线中，计算样品中各磺胺组分的浓度。