[发明专利]亮丙瑞林的固液合成法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种亮丙瑞林的合成方法，特别涉及一种亮丙瑞林的固液合成法。

背景技术：

醋酸亮丙瑞林是促黄体生成释放激素(LH-RH)的高活性衍生物，它广泛用于治疗早熟、子宫内膜异位症、子宫肌瘤或绝经前乳腺癌等女性患者和前列腺癌等男性患者。在以往的报道中有固相合成法合成亮丙瑞林(ref：Tetrahedron.53，9，1997，3179-3194)，即采用类Merrifield树脂，从碳端开始前四个氨基酸采用BOC法，后四个氨基酸采用Fmoc法依次连接，最终使用乙胺液体从树脂上切割下来。然而使用液体乙胺切割，需要在低温、带压力密封下进行，在工业化生产中不方便，难以大规模生产。我们从这个角度出发研发了这种固液相结合的合成方法，通过Fmoc固相法合成全保护的多肽片断，再通过液相片断合成法完成肽链的合成，既保持固相合成的快速，又可以在非常温和的条件下切割，便以大规模的制备。

发明内容：

本发明的目的是提供一种合成亮丙瑞林的方法，解决目前采用固相合成法使用液体乙胺切割不方便、不安全及采用液相片断合成时间长的问题。本实用的技术方案包括如下步骤：

1.选用Arg(pbf).Trt(2-Cl)-ClResin在有机溶剂中通过固相合成法合成序列为PGlu-His-Trp-Ser-Tyr-(D)-Leu-Leu-Arg的全保护多肽。有机溶剂为二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺和N，N-二甲基乙酰胺中的一种。

2.BOC-Pro-OH溶解到适量的有机溶剂中，加入NMM或Et₃N，在-10℃～-15℃加入氯甲酸乙酯搅拌15～30min，加入乙胺盐酸盐和NMM或Et₃N，室温搅拌过夜后处理得到BOC-Pro-NHEt。合成的BOC-Pro-NHEt经2mol/L二氧六环盐酸气脱保护得到H-Pro-NHEt.HCl。有机溶剂为四氢呋喃和N，N-二甲基甲酰胺中的一种。

3.全保护多肽PGluR-8和H-Pro-NHEt.HCl溶解到适量的有机溶剂中，加入HOBt和NMM或DIEA，冰浴下搅拌5～15min，加入BOP或DIC，15～30min后撤掉冰浴，10℃-30℃搅拌24-36小时后得到全保护的PGluP-9-NHEt。有机溶剂为N，N-二甲基甲酰胺和N，N-二甲基乙酰胺溶剂中的一种。

4.全保护肽PGluP-9-NHEt溶于切割液(V/V％，三氟醋酸∶对甲苯酚∶水∶苯甲硫醚∶硫醇为82.5∶5∶5∶5∶2.5)经脱保护得到亮丙瑞林粗品。

本发明中一些常用的缩写具有以下含义：

BOC-Pro-OH：N-叔丁氧羰基-脯氨酸

DMF：N，N-二甲基甲酰胺

HOBt：1-羟基苯并三唑

NMM：N-甲基吗啡啉

BOC-Pro-NHEt：N-叔丁氧羰基-脯氨酸乙胺

H-Pro-NHEt：脯氨酸乙胺

BOP：卡特缩合剂

Et₃N：三乙胺

PGlu：焦谷氨酸

His：组氨酸

Trp：色氨酸

Ser：丝氨酸

Tyr：酪氨酸

(D)-Leu：D-亮氨酸

Leu：亮氨酸

Arg：精氨酸

Pbf：2，2，4，6，7-五甲基-2H-苯并呋喃-5-磺酰基

Trt(2-Cl)-ClResin：2-氯-三苯基氯树脂

Fomc-Leu-OH：N-芴甲氧羰基-亮氨酸

collidine：三甲基吡啶

DIC：二异丙基碳化二亚胺

DIEA：二异丙基乙胺

piperide：哌啶

Fmoc：芴甲氧羰基

TFA：三氟醋酸

CH₂Cl₂：二氯甲烷

tBu：叔丁基

Trt：三苯基

PGluR-8：序列为PGlu-His-Trp-Ser-Tyr-(D)-Leu-Leu-Arg八肽的缩写

PGluP-9-NHEt：序列为PGlu-His-Trp-Ser-Tyr-(D)-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEt九肽的缩写

合成路线如下：

本发明的有益效果是：本发明通过固液结合合成亮丙瑞林，既避免了纯固相合成从树脂上切割不方便、不安全，又简化了纯液相片断合成的繁琐，缩短了合成时间。

具体实施方式：