[发明专利]重组恶性疟原虫环子孢子表面蛋白及其制法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及DNA重组技术和基因工程疫苗领域。更具体地，本发明涉及一种源自恶性疟原虫环子孢子表面蛋白的重组蛋白；编码所述重组蛋白的DNA序列；含所述DNA序列的载体；含所述载体的宿主细胞；含所述重组蛋白的疫苗；用基因工程制备该重组蛋白的方法；以及该重组蛋白在制备抗疟疾疫苗方面的应用。

背景技术

疟疾是人类最古老的传染病之一，目前仍严重影响人类的健康。据世界卫生组织(WHO)的最新调查，约世界人口的40％仍处在疟疾威胁之中，分布于100多个国家。目前世界上每年有3至5亿人罹患疟疾，其中约300万人死亡。更为严重的是，由于疟原虫及蚊媒抗药性的产生和迅速扩散，疟疾不仅没有得到有效控制，反而有卷土重来之势。因此，开展全球遏制疟疾计划已成为WHO在新世纪两个重点研究领域之一。

人们在疟疾防治中依靠或期望获得突破的主要有三个途径：抗疟药、疟疾疫苗和蚊媒防制。但抗疟药及蚊媒防制面临着巨大的困难和挑战，这是因为疟原虫及蚊虫抗药性的产生和扩散。尽管目前尚未有应用价值的疟疾疫苗问世，但普遍认为发展疟疾疫苗是人类控制乃至消灭疟疾的重要途径。

大量研究表明，疟疾是可以通过研制有效的疫苗而实现预防的。如用灭活子孢子免疫的志愿者能完全保护后来的攻击感染。再如用鼠疟原虫的重组抗原免疫小鼠，亦能完全保护后来同种疟原虫的攻击感染。此外，疟疾流行病学研究也显示，死于疟疾的主要是无疟疾免疫力的人群，如：在疟区的儿童和非疟区人群进入疟区，而在疟区的成人很少因疟疾而死亡。如给这些无免疫力的人群接种有效的疫苗，使其达到与疟区成人同样的免疫力，这样就能实现预防疟疾和降低疟疾死亡率的目标。因此，疟疾疫苗研制已成为当今世界性热点课题。

疟疾疫苗的研究已进行了20多年，但至今仍无可应用的有效疟疾疫苗问世。目前正在研究开发的疟疾疫苗有3种，即：抗子孢子疫苗，红内期疫苗和阻断传播的疫苗。然而，这些疫苗均因为效力低下、持续时间短、或不稳定等原因，应用受到限制。

此外，研制由疟原虫红外期和红内期等抗原组成的多价多期疫苗是疟疾疫苗研发的趋势。本申请人已经研制了含有主要裂殖子表面抗原(MSP1)和裂殖子顶端膜抗原(AMA-1)的融合蛋白的疫苗(也称为PfCP-2.9)，其是一种红内期疟疾疫苗。为提高疫苗的免疫保护效力，需要寻找合适的红外期抗原与其联合应用，以达到全面且良好的防治疟疾的效果。

发明内容

本发明的目的就是提供源自恶性疟原虫环子孢子表面蛋白的重组蛋白。

在本发明的第一方面，提供一种重组蛋白，所述重组蛋白具有以下结构：

元件B-连接肽-元件A；或

元件A-连接肽-元件B；

其中，

元件A为恶性疟原虫环子孢子表面蛋白的C端免疫区；

元件B为无，或恶性疟原虫环子孢子表面蛋白中除C端免疫区以外的免疫反应表位区域；

连接肽为无，或长度为1-30氨基酸的肽，所述的连接肽对于元件A和元件B的构象基本上无影响。

并且，所述的重组蛋白不具有恶性疟原虫环子孢子表面蛋白的氨基酸序列，更优选的，所述的重组蛋白不具有SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列。

在本发明的另一优选例中，所述恶性疟原虫环子孢子表面蛋白的C端免疫区是恶性疟原虫环子孢子表面蛋白中位于中心重复区与锚定区之间、且不包括中心重复区与锚定区的氨基酸序列。

在本发明的另一优选例中，所述恶性疟原虫环子孢子表面蛋白的C端免疫区包括：恶性疟原虫环子孢子表面蛋白第二区域(RII区域)和C-末端内的T、B细胞表位。

在本发明的另一优选例中，在所述元件A的氨基酸序列中，消除了糖基化位点的氨基酸序列。更优选的，将所述的恶性疟原虫环子孢子表面蛋白的第382位的Asn转变为Ala，从而消除糖基化位点。

更佳地，所述的元件A具有SEQ ID NO：2中第5-116位的氨基酸序列。

在本发明的另一优选例中，除了连接、克隆、表达或纯化相关位点以外，所述重组蛋白上的其它区域均来源于恶性疟原虫环子孢子表面蛋白。

在本发明的另一优选例中，所述元件B是恶性疟原虫环子孢子表面蛋白中心重复区的部分或全部的氨基酸序列。

在本发明的另一优选例中，所述的中心重复区的氨基酸序列为：(NANP)_n，其中，n＝3-34。

在本发明的另一优选例中，所述的中心重复区的氨基酸序列为：(NANP)₁₅。