[发明专利]Leydig细胞的分离方法及其用途

权利要求书

1.一种获得Leydig细胞的方法，其特征在于，它包括步骤：

a.将用胶原酶消化的睾丸组织通过孔径为20-100μm的滤网过滤，得到睾丸间质组织内细胞；

b.将获得的睾丸间质组织内细胞在培养液中培养10分钟-4.5小时，取贴壁细胞得到Leydig细胞。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤a中所用胶原酶浓度为0.01-5％，其中所含的胶原酶消化液与睾丸组织的体积(毫升)重量(克)比为1-5∶1。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的胶原酶选自I型胶原酶、II型胶原酶或复合胶原酶。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的过滤网孔为25-50μm。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤b中贴壁培养时间为0.5-3小时。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤b的培养液中含血清0-10％。

7.一种如权利要求1所述的方法得到的Leydig细胞，其特征在于，所得到的细胞中含有0.1-20％Leydig干细胞及前体细胞。

8.根据权利要求1所述的方法得到的Leydig细胞的用途，其特征在于，它包括：

(i)所述的Leydig细胞用作构建组织工程化雄激素分泌组织的种子细胞；

(ii)所述的Leydig细胞用作体内细胞移植，包括全身皮下、肌肉组织内、腹腔内、肾包膜内、睾丸鞘膜腔内、睾丸原位皮下、腹股沟、静脉内及微包囊包裹后上述部位移植；

(iii)所述的Leydig细胞也可用于有关Leydig细胞的细胞生物学、发育生物学、免疫学、毒理学及药理学等研究与应用。

9.一种Leydig细胞悬液，其特征在于，它包括(1)细胞培养液；和(2)Leydig细胞，所述的Leydig细胞中含有0.1-20％Leydig干细胞及其前体细胞。

10.一种组织工程化雄激素分泌组织移植物，其特征在于，它包括：(a)生物可降解材料；和(b)接种于所述生物可降解材料的如权利要求7所述的Leydig细胞。