[发明专利]用金磁微粒去除高丰度蛋白的方法

权利要求书

1.一种用金磁微粒去除高丰度蛋白的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：

1]用金磁微粒固定高丰度蛋白的亲和配基：取金磁微粒置于离心管中，磁性分离，弃上清；用偶联缓冲液清洗两次，磁性分离，弃上清；加入溶解在偶联缓冲液中的高丰度蛋白亲和配基，20～40℃条件下，充分反应10min～30min，磁性分离，弃上清；加入清洗缓冲液清洗，磁性分离，弃上清；加入保存缓冲液，2～8℃保存备用；

2]稀释待处理生物样品：对待处理生物样品用去除缓冲液进行稀释；

3]将金磁微粒和待处理生物样品共同反应：将固定了高丰度蛋白亲和配基的金磁微粒磁性分离，弃上清，加入去除缓冲液，混合均匀，磁性分离，弃上清；加入稀释后的待处理生物样品，20～40℃条件下，充分反应5min～60min；

4]去除高丰度蛋白：将反应后的金磁微粒磁性分离，移取分离后上清即为去除了白蛋白或/和抗体的生物样品。

2.根据权利要求1所述的用金磁微粒去除高丰度蛋白的方法，其特征在于：所述方法包括金磁微粒的封闭步骤：在固定了高丰度蛋白亲和配基的金磁微粒加入保存缓冲液之前，先加入封闭剂，在20～40℃条件下，充分反应2h，磁性分离，弃上清；再加入清洗缓冲液清洗，磁性分离，弃上清，重复清洗三次。

3.根据权利要求1所述的用金磁微粒去除高丰度蛋白的方法，其特征在于：所述方法包括金磁微粒的再生步骤：将去除了高丰度蛋白的金磁微粒用再生缓冲液清洗，将吸附到金磁微粒上的高丰度蛋白洗脱下来，再将金磁微粒加入保存缓冲液，2℃～8℃保存备用。

4.根据权利要求3所述的用金磁微粒去除高丰度蛋白的方法，其特征在于：所述方法包括金磁微粒的封闭步骤：在固定了高丰度蛋白亲和配基的金磁微粒加入保存缓冲液之前，先加入封闭剂，在20～40℃条件下，充分反应2h，磁性分离，弃上清；再加入清洗缓冲液清洗，磁性分离，弃上清，重复清洗三次。

5.根据权利要求1或2或3或4所述的用金磁微粒去除高丰度蛋白的方法，其特征在于：所述待处理生物样品是血清、血浆、脑脊液；所述高丰度蛋白是浓度高于10μg/ml的高丰度蛋白，包括白蛋白、IgG、转铁蛋白、C3补体、IgA、IgM、胰蛋白、珠蛋白、脂蛋白、F因子、C9补体、C4补体、铜蓝蛋白、载脂蛋白B、载脂蛋白A-1、α-1-酸性糖蛋白、H因子、补体因子B、前白蛋白或C1q补体；所述高丰度蛋白的亲和配基包括蛋白A/G及其衍生物、相应高丰度蛋白的抗体或者多肽。

6.根据权利要求1或2或3或4所述的用金磁微粒去除高丰度蛋白的方法，其特征在于：所述偶联缓冲液是0.005M～1M的pH7.0～9.0的Tris-HCl缓冲液，或者是0.005M～1M的pH9.0～11.0的碳酸盐缓冲液，或者是0.005M～1M的pH5.6的醋酸盐缓冲液，或者是0.005M～1M的pH3.0～7.0的柠檬酸盐缓冲液，或者是0.005M～1M的pH7.0～9.0的TBS缓冲液，或者是0.005M～1M的pH3.0～7.0的TE缓冲液，或者是0.5×～10×的pH5.0～8.0的PBS缓冲液；所述清洗缓冲液为上述偶联缓冲液或者是含0.02～0.2％吐温的偶联缓冲液；所述封闭剂是偶联缓冲液与1％～10％外加成份的混合溶液，外加成份是牛血清白蛋白、赖氨酸、脱脂奶粉、乙醇胺和动物血清中的一种或多种的混合物；所述去除缓冲液是0.005M～1M的pH7.0～9.0的Tris-HCl缓冲液或者0.5×～20×的pH5.0～8.0的PBS缓冲液；所述再生缓冲液是0.01M～1M的pH2～5的Gly-HCl缓冲液或者0.01M～1M的pH2～5的柠檬酸盐缓冲液，所述保存缓冲液是上述偶联缓冲液或者是上述偶联缓冲液、防腐剂和保护剂的混合溶液，所述防腐剂是0.01～0.1％的叠氮钠或者0.01～0.1％的硫柳汞，所述保存缓冲液是0.05～1％BSA或者0.05～1％的动物血清或者0.05％～1％的蛋白酶抑制剂。