[发明专利]用金磁微粒对体液中生物分子进行免疫学检测的方法

说明书

技术领域

本发明属免疫学检测领域，具体涉及一种以金磁微粒为载体对体液中生物分子进行免疫学检测的方法。

背景技术

传统的检测体液中生物分子的方法大多采用以聚苯乙烯等材料为载体的酶联免疫检测法，比种方法较为简便，但它的不足之处在于检测的灵敏度较差，反应时间较长。

磁性微粒，又称磁性微球或磁珠，是由超顺磁性纳米粒子，包括磁性金属如Fe、Co、Ni或其金属氧化物等，与高分子或无机材料等形成的一种胶态液体复合物，它除具有纳米颗粒的特征外，还可以通过表面的功能基团进行各种表面的功能化修饰；而且，它具有顺磁性，可在外加磁场的作用下快速移动和分离。基于以上特点，磁性微粒已广泛应用于生物学、医学等领域。

磁性复合微粒应用于传统的免疫学检测方法中，以磁生微粒作为载体，磁性微粒提供巨大的表面积和磁分离性，而结合于磁性微粒表面的蛋白质能提供特异性的亲和特性，所以在外加磁场的定向控制下，通过吸附、清洗、解吸等操作，可以一步从复杂的生物体系中分离得到目标生物分子，具有磁性分离简便、亲和吸附高特异性以及巨大表面积的高敏感性等众多优点。

磁性微粒大多以磁性金属氧化物作为核心，在其表面包覆一层有机聚合物等，通过有机聚合物表面的功能基团与相应的生物分子进行共价偶联，然后用于免疫学检测。但此种方法会使得偶联的生物分子的活性受损，且偶联的条件较苛刻，限制了其在检测系统中的应用。中国专利ZL 03124061.5和ZL 03153486.4分别公开了一种组装型结构及核/壳型结构的磁性复合微粒的制备和应用。由于其表面包覆着纳米级的金、银等贵金属颗粒，可以使得蛋白质或抗体等分子通过半胱氨酸的-SH、表面疏水相互作用或电荷作用等牢固的固定在其表面，条件温和、对生物分子的固定容量较大，并且可以最大限度地保持偶联后生物分子的活性，这样可以大大提高检测的灵敏度。但其检测时间一般在12小时以上，检测方法也有局限性。

传统的酶联免疫检测方法是把所需的蛋白质标记于面积有限的固相载体上，限制了此种方法的敏感性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用金磁微粒对体液中生物分子进行免疫学检测的方法，其解决了背景技术中检测所用时间长以及固定容量较小、灵敏度相对较低、偶联的生物分子的活性易受损的技术问题。

本发明的技术解决方案如下：

一种用金磁微粒对体液中生物分子进行免疫学检测的方法，其实现步骤包括：

(1)固定：以金磁微粒为反应和分离的固相载体，将抗原或抗体偶联在金磁微粒的表面；所述将抗原或抗体偶联在金磁微粒表面的方法包括：

(1.1)预处理：取金磁微粒，用偶联缓冲液清洗1～3次；

(1.2)偶联：将需要偶联的抗原或抗体溶解于偶联缓冲液中，混匀，加入到经预处理的金磁微粒中，置于摇床中，在20～40℃，170～190rpm条件下充分反应；反应完毕，磁性分离，弃上清；

(1.3)平衡：用平衡缓冲液清洗1～2次，磁性分离，弃上清；

(2)封闭：用封闭液，在20～40℃，170～190rpm条件下，在摇床中封闭反应1～2小时，封闭金磁微粒表面未与抗原或抗体偶联的空余位；磁性分离，弃上清；用清洗缓冲液清洗2～4次，悬于保存缓冲液中保存备用；

(3)与待测物结合：使包被在金磁微粒表面的抗原或抗体与体液中特异性的抗原或抗体结合，形成特异性抗原-抗体复合物；

(4)磁性分离：通过外加磁场将分离出特异性抗原-抗体复合物；

(5)与标记物结合：将金磁微粒表面的特异性抗原-抗体复合物与带标记物的特异性抗原或抗体相结合；

(6)检测：根据待测物及标记物用相应的检测方式检测。

上述预处理是取金磁微粒，先加入偶联缓冲液平衡1～2min，弃上清，再用偶联缓冲液清洗1～3次。

上述用封闭液封闭金磁微粒表面未与抗原或抗体偶联的空余位，在摇床中的反应时间，经反复实验、对比、分析，1小时是确保最佳效果的最短时间。

上述检测方式可采用酶联免疫吸附实验、化学发光检测法或荧光免疫分析法。其中，化学发光检测法灵敏度较高，荧光免疫分析法的灵敏度更高。