[发明专利]岩藻糖苷酶诊断试剂盒及岩藻糖苷酶活性测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种岩藻糖苷酶诊断试剂盒，同时本发明还涉及测定岩藻糖苷酶活性的方法，属于医学检验测定技术领域。

背景技术

1980年法国学者Deugnier等研究发现，原发性肝癌患者血清岩藻糖苷酶升高，并被众多的研究所证实。故有人提出岩藻糖苷酶可作为原发性肝癌的肿瘤标志物，与甲胎蛋白联合或参照应用大大提高了诊疗价值。近年来研究发现，岩藻糖苷酶对某些疾病的发生、发展均具有重要意义。

血清岩藻糖苷酶测定主要有荧光法和比色法。比色法以4-硝基苯α-L-岩藻吡喃糖苷或4-硝基苯α-L-岩藻糖苷为底物显色，本法简便，设备要求不高，国内外广泛采用。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提出一种利用酶比色法(EnzymaticColorimetric Method)技术，连续监测色原在410或366nm波长处吸光度的变化，得以测定岩藻糖苷酶活性的方法，同时，本发明还将给出用以实现该方法的岩藻糖苷酶诊断试剂盒，采用该试剂盒不仅可以在紫外/可见光分析仪或半、全自动生化分析仪上进行岩藻糖苷酶活性测定，而且测定速度快、准确度高，因而可以得到切实的推广应用。

本发明岩藻糖苷酶活性测定方法原理如下：

合成色原岩藻糖苷底物岩藻糖苷酶色原+相应岩藻糖苷

这种方法应用岩藻糖苷酶酶促反应连续监测法，岩藻糖苷酶酶解合成色原岩藻糖苷底物释放出色原(在410或366nm处有吸收峰)，从而得以测定410或366nm处吸光度上升的速度，可以测算岩藻糖苷酶的活性大小。

实验表明，从测定结果的准确性和配制成本的经济性两方面综合考虑，无论是单剂或双剂，如下成分关系的本发明岩藻糖苷酶诊断试剂盒较为理想：

缓冲液                    500mmol/L

稳定剂                    10mmol/L

合成色原岩藻糖苷底物      3mmol/L

本发明的岩藻糖苷酶诊断试剂盒可以是单剂，包括：

缓冲液、稳定剂、合成色原岩藻糖苷底物。

试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。

也可以将上述单剂试剂配成如下双剂试剂：

试剂1

缓冲液。

试剂2

缓冲液、稳定剂、合成色原岩藻糖苷底物。

合成色原岩藻糖苷底物在试剂1或试剂2中的位置可以不限。试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。

无论是单剂或双剂，本发明测定岩藻糖苷酶活性的方法，其合成色原岩藻糖苷底物可以是对硝基苯基-2-o-(α-L-吡喃岩藻糖苷)-β-D-吡喃半乳糖、对硝基苯基-岩藻糖苷、对硝基苯基-α-L-吡喃岩藻糖苷或4-甲基伞形酮-α-L-岩藻糖苷中的一种。

具体实施方式

下面结合实施例子对本发明作进一步的说明。

实施例一

本实施例的岩藻糖苷酶诊断试剂为单试剂，包括：

柠檬酸钠缓冲液 pH6.0                        500mmol/L

稳定剂                                      10mmol/L

对硝基苯基-2-o-(α-L-吡喃岩藻糖苷)-β-D-吡喃半乳糖

                                            3mmol/L

试剂全部溶解配好后，分装入瓶，进行冷冻干燥，制成干粉试剂；使用前，加入纯净水，复溶后使用。

在全自动生化分析仪上设定：温度37℃，反应时间10分钟，起始吸光度≤0.1，测试主波长410nm，测试副波长505nm，被测岩藻糖苷酶样品与试剂的体积比例为1/25，反应方向为正反应(上升反应)，延迟时间大约1分钟左右，检测时间2分钟左右。

加入样品和试剂后，使之混合并发生反应，最终将反应物置于生化分析仪下，检测主波长410nm吸光度上升的速度，从而测算出岩藻糖苷酶的活性大小。

实施例二

本实施例的岩藻糖苷酶诊断试剂为双试剂，包括：

试剂1

柠檬酸钠缓冲液  pH6.0                    500mmol/L

试剂2